牡丹花瓣脂氧合酶测定方法的研究.doc

牡丹花瓣脂氧合酶测定方法的研究摘要:采用紫外分光光度法,以亚油酸钠为反应底物,研究了牡丹花瓣脂氧合酶(LOX)的酶学特性并建立了其测定体系。结果表明,,最适温度为45℃,。该酶有着较好的热稳定性,90℃保温1h后仍保持较高活性。本文来源于网络,本站发布的论文均是优质论文,供学习和研究使用,文中立场与本网站无关,版权和著作权归原作者所有,如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除已转载的信息,如果需要分享,请保留本段说明。关键词:牡丹花瓣;脂氧合酶(LOX);测定方法中图分类号:Q556文献标识号:A文章编号:1001―4942(2010)09―0091―04 牡丹是原产我国的世界名花,具有很高的观赏性和药用价值。牡丹花朵较大,开花期间香气浓郁,目前已分离到的与牡丹花瓣芳香气味有关的化合物主要是一些醇、醛、酯类物质。在植物体内,这些小分子物质主要是由脂氧合酶/脂氢过氧化物裂解酶(LOX/HPL)联合催化途径催化产生,其中LOX是该途径的首个酶,也是一个关键酶。脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX),又叫亚油酸氧化还原酶、脂肪氧合酶、脂肪加氧酶或类胡萝卜素氧化酶,广泛存在于哺乳动物、植物和微生物中。LOx是一种含非血红素铁或锰的加氧酶,能专一催化包括亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸在内的具有顺,顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸及其相应酯的加氧反应,从而生成具有共轭双键的脂肪酸氢过氧化物(Hydroperoxides,HPOD)。在花瓣中,HPOD再进一步被脂氢过氧化物裂解酶(HydropemxideLyase,HPL)及其下游一系列的酶催化,从而生成各种挥发性的小分子醇、醛和酯类物质。目前,测定LOX活性的方法很多。常规的实验室测定方法有分光光度法、氧电极法、同位素标记法等;快速测定方法有亚甲蓝染色法(MBB)、胡萝卜索染色法(CB)、淀粉一碘化钾法(KI-S)等。其中,分光光度法具有快速、简便和易于连续测定的优点,有利于花瓣LOX酶学性质的研究以及简便、准确、重复性好的LOX活性测定体系的建立,可为牡丹芳香气味形成的生理基础研究提供依据。 1 材料与方法 材料试验材料为盛花期的牡丹(洛阳红),试剂均为国产分析纯。 方法 反应底物(亚油酸钠母液)的制备参照Surrey等的方法,略作修改。,然后用1mol/L氢氧化钠溶液滴至澄清,定容至20ml,于冰箱中冷藏备用。 ,(),加入石英砂后研磨,组织匀浆在冷冻离心机(4℃)中15000×g离心30min,收集上清液,30℃冰箱保存,用于相关指标测定。 LOX活性的测定参照Axelrod等(1981)的方法,反应温度为室温,反应体系为3ml(,酶液25μl,底物45μl),加入酶液15s后开始计时,记录3min内OD234值的变化,酶活性以AOD234/(gfw?min)表示。重复3次。 牡丹花瓣LOX最适pH值的测定设定不同pH条件:-,pH6