1252紫外分光光度法快速测定小麦胚芽脂肪氧化酶活力.doc

1252紫外分光光度法快速测定小麦胚芽脂肪氧化酶活力
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:徐斌董英胡庆松余雅斌刘筠钧
【关键词】紫外分光光度法小麦胚芽脂肪氧化酶活力
1 引言
小麦胚芽(WG)中的脂肪氧化酶(LOX)能催化氧化WG中的亚油酸,使WG短期内酸败变质。为延长保质期,常采用加热处理钝化LOX。为了最大限度地保护WG营养,加热温度和时间的选择尤为重要。而LOX 活性的准确测定则是进行麦胚稳定化理论研究的基础。研究表明,底物溶液的透明度、反应缓冲体系pH 、反应温度、底物及Tween浓度等因素均会影响测定结果。现有的测定方法的酶纯化过程繁琐。此外,不同来源的LOX的最适pH和最适温度有着较大差异,应根据原料类型进行选择。为此,建立了一种改良的WG中LOX的检测方法,简单快速获得了透明的底物溶液,省去了粗酶液纯化的繁杂步骤。
2 实验部分
仪器与试剂 DU800 核酸蛋白分析仪(Beckman公司);BR4冷冻离心机(Jouan公司);pHS
3B精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。小麦胚芽(江南面粉公司);亚油酸标准品(Fluka公司);其它试剂均为分析纯。
样品制备取10 g小麦胚芽,粉碎,加入100 mL mol/L醋酸盐缓冲液(pH ),4 ℃下搅拌30 min,悬浮液12000 r/min离心30 min,获得酶提取液。用醋酸盐缓冲液稀释10倍,作为酶测定液。
底物的配制取111 μL亚油酸,无水乙醇定容到10 mL, mL,加入40 μL Tween20。减压蒸去乙醇,残余物溶解在50 mL mol/L Na2HPO4溶液中,1 mol/L 。 mmol/L。
酶活的测定检测波长234 nm,温度25 ℃;反应液: mL缓冲溶液,200 μL底物溶液,50 μL粗酶液;参比液: mL缓冲溶液,200 μL底物溶液,50 μL钝化处理的粗酶液。
【关键词】紫外分光光度法小麦胚芽脂肪氧化酶活力
1 引言
小麦胚芽(WG)中的脂肪氧化酶(LOX)能催化氧化WG中的亚油酸,使WG短期内酸败变质。为延长保质期,常采用加热处理钝化LOX。为了最大限度地保护WG营养,加热温度和时间的选择尤为重要。而LOX 活性的准确测定则是进行麦胚稳定化理论研究的基础。研究表明,底物溶液的透明度、反应缓冲体系pH 、反应温度、底物及Tween浓度等因素均会影响测定结果。现有的测定方法的酶纯化过程繁琐。此外,不同来源的LOX的最适pH和最适温度有着较大差异,应根据原料类型进行选择。为此,建立了一种改良的WG中LOX的检测方法,简单快速获得了透明的底物溶液,省去了粗酶液纯化的繁杂步骤。
2 实验部分
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.1 仪器与试剂 DU800 核酸蛋白分析仪(Beckman公司);BR4冷冻离心机(Jouan公司);pHS3B精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。小麦胚芽(江南面粉公司);亚油酸标准品(Fluka公司);其它试剂均为分析纯。
样品制备取10 g小麦胚芽,粉碎,加入100 mL mol/L醋酸盐缓冲液(pH