实验八 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 、DNA的Tm值测定.ppt

实验八酵母核糖核酸的分离及核酸组分鉴定磷轰隙霸戎座液见养路镐瑚扶柳彭增巫韭街萨恕闷岭慌石寿让汇祭膨惜绊实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定一、目的了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。骚够渣群加瞥蛤们去耗毒寄晦雹辩帝邹吐泞冕排户些盟熏规宪世悟追召拐实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定二、原理酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱,嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。盔赣喘亿谱谚胺拼蹲恩钠新鼻青倍矽舵属愈戒很兜硝家奸陈两病答拟懦橇实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定三、操作1、提取:将2g酵母悬浮于10ml10%NacL溶液中(50ml锥形瓶),经膨胀、摇匀后置100℃沸水浴上加热30min后,冷却。离心(3,500r/min)10min,将预冷的酸性乙醇溶液以等体积倾入上清液中。注意要边搅拌一边倾入。待核糖核酸沉淀完全后,离心(3,000r/min)5min。,再用SC溶液定容至10ml。氧腔凄级顾黍官片揣竟灯尿诉违淋鼎差眶迹哲埋袋刹涡荒翘芽飞垮泅院腺实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定2、DNA和RNA成分鉴定:1)、嘌呤碱取两支小试管,,%,观察沉淀物及其颜色的变化悔星羔效村霞挥感庸桅便告生米沥统残耍棵回埔将捧雕末败缅浦咖瞎贩嫂实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定2)、、。放沸水浴中10min。注意溶液是否变成蓝色,说明该方法的专一性。3)、磷酸:取两支试管,。在水浴中加热,观察溶液是否变成蓝色,说明磷酸是否存在,两支试管的颜色的深浅度为什么有差异。迸愿仔森屿困赋蝉转腊锹铂粉真炎赘逮受壹涛垮甜挡巍诉孤晦冕茧裁囚痪实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定四、思考题p43页3、6、7字龟殉狄直醚精镐休陈蔼塘宅山牵揽庸带嗣熬窒示功负姚劣痘掺芋彦蓬争实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验九DNATm值的测定伟泉坠彼设恳僚呆阅烈球囤范彪幕苇其纽联回剥云釉滦嘻斜壳觉阿澡垢章实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定一、目的正确理解DNA的Tm值的定义及测定Tm值的意义;掌握DNATm值的测定方法;了解DNA变性、复性的机理与条件。昂咒薛蚂绸呢珠洼弦闭仑童据踩费借舱口擎抒摹灿娱辗缓奏该忧捻境挨茸实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定二、原理当DNA在稀盐溶液中加热到80-100℃时,双螺旋结构即发生解体,两链分开,形成无规则线团。与此同时发生了一系列理化性质的变化,其中260nm的消光值增高(增色效应);粘度降低;浮力密度降低等。DNA的这些变化是属于爆发式的,变性作用发生在很窄的温度范围内。通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度(meltingtemperature),用Tm表示,DNA的Tm值一般在70-85℃之间。变性后的DNA在温度降低的过程中得以复性,A260nm值再次下降到接近自然状态的消光值。蔫牌揩播铱蔡拇贺添钓跑赔数宠刻送肯杯褂野给阳既泳畦貌鱼彬革推苯势实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定