产淀粉酶(α-淀粉酶)细菌菌株筛选.doc

产淀粉酶(α-淀粉酶)细菌菌株筛选一、实验目的: 。。。二、实验原理: -淀粉酶是一种液化型淀粉酶,它的产生菌,广泛分布于自然界,尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。 ,大致可以分成以下四个步骤:采样、富集培养、初步筛选、分离纯化和性能测定。a)采样:即采集含菌种的样品 采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多,然后才可着手做各项具体工作。在土壤中几乎各种微生物都可以找到,因而土壤可说是微生物的大本营。例如厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多。b)初步筛选:i.(选择培养基)初筛使用选择培养基对菌种进行培养,通过培养基的特殊成分,来筛选出目的菌种,从而进行培养。ii. (鉴别培养基)初筛利用鉴别培养基,通过添加一些特殊的试剂或成分来鉴别出目的菌种,从而筛选出来并对其进行培养。c)分离纯化:通过上述的筛选只能说我们要分离的目的菌种已经存在,但还要把夹杂在其中的杂菌除去,从而得到纯种的菌落。纯种分离的方法很多,主要有:平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。e)性能测定:分离纯化得到的菌种之后,所分得的菌种是否具有实验所要求的性能,还必须要进行性能测定后才能决定取舍。三、实验材料::恒温培养箱,高压蒸汽灭菌锅,移液管,培养皿,试管,三角瓶,量筒,酒精灯,水浴锅,接种环试剂和材料:NaCl,NaOH,HCl,CaCl2,MgSO4,NaCl,K2HPO4,柠檬酸钠,硫酸铵,Na2HPO4,淀粉,牛肉膏,蛋白胨,:a)2%淀粉溶液:准确称取淀粉2g溶于100ml  。b)、pH=)1%的3,5-二硝基水杨酸:精确称取1g3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml 2mol/L氢氧化钠溶液中,加入蒸馏水50ml,再加入四水酒石酸钾钠30g,待溶解后用蒸馏水定容100ml,盖紧瓶塞,隔绝CO2。 d)%葡萄糖溶液:准确称取80℃,去离子水溶解后定容至100ml。 e)%标准麦芽糖溶液:称取麦芽糖100mg,用蒸馏水溶解并定容至100ml。四、实验方法: (一).:如下配置淀粉琼脂培养基:,10g蛋白胨,5g牛肉膏,5gNaCl,加少量蒸馏水加热溶解,然后称量16g琼脂加入烧杯中溶化,补蒸馏水至1000mL,再用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl,〔9〕。分离培养基:%,%,CaCl2 %,MgSO4 %,NaCl %,K2HPO4 %,%,%(溶解后加入),%,。,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,应控制火力并需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。