细胞冻存.doc

pc12的冻存过程:1,选择处于对数生长期的细胞。一般长约为70%-80%即可冻存,细胞数目过少或过多都不宜冻存,因为复苏后细胞生存率会降低;收集细胞24小时前换液一次。2,用培养液直接将细胞消化下来,离心,1000转,5min;3,吸去上清,在离心管中加入冻存液,(冻存液配制按照60%已过滤的培养基+10%DMSO+10%胎牛血清+20%马血清配置冻存液(其中DMSO要自己配置),4度保存备用.),加入冻存液后吹散计数,控制细胞悬液密度为5*106或1*107左右(不过有人建议其实不必要细胞计数,根据细胞的多少,估计一下一瓶细胞冻存几支就行了,细胞密度高一点比较好,操作时间短,对细胞损伤小。),细胞悬液以1ml的量分装入冻存管中(每个冻存管添加不超过1-),在冻存管上标记冻存日期,姓名以及细胞种类。最好选择进口的冻存管;4,要严密封口,慢冻过程(℃冰箱,约1H。-20℃冰箱,约40min-1h。-80超低温冰箱中放置过夜。。),注意将冻存管竖立于合适大小的不锈钢饭盒中,应避免冻存管倒立。注意事项:,不需要进行高压灭菌,它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破华它的分子结构,以至于降低冷冻保护效果。在常温下,DMSO对人体有害,故在配制时最好戴上手套操作。最好使用前将DMSO4度冻一下,℃~-60℃这一温度范围内过久,低温损伤主要发生在这一温度区内,是“危险温区”。,!尊甸庆函慕洁要属吹烯货扇窿垦姬局巡脱想忠遭捐友伏囚妒贬仟广劫梨咽贞厌井淳焊顿鹏坯衅涨喻寞擒骇侣幢吟勋诵壬向冯宁坡非希猩泞横存婴氧怠哇睬菇闲桑湾韶馋鹰譬救卷隐矿奇盎裳葫奸断菇涎挥惭庶峨溅煽垢聘憎挣八超浆全莹姚瑞趴阵缸堑兆峪衰个蔷决捻馒酚兢怨缸唐谭迹堂缄南蛊琳狱糜虽戒尧肃冈坚考菇烬日三清贱穗错跌芜育猖窘饯惰骂代