灵芝多糖提取.ppt

、酸提法、碱提法、、、微波辅助提取法、高压脉冲法水提醇沉法流程赤灵芝烘干粉碎过筛水浴提取真空抽滤浓缩除蛋白醇沉多糖脱色干燥多糖灵芝多糖提取工艺赤灵芝预处理传统水提离心分离收集上清液Seavage法除蛋白透析乙醇沉淀离心收集沉淀冷冻干燥灵芝多糖多糖的提取(1)原料的处理灵芝中的多糖存在于细胞壁中,粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出,但给后面的分离过滤造成困难,使粗多糖溶液大量流失,造成多糖得率不高。(2)原料的复水加水浸泡,使粉末充分吸水膨胀,便于多糖的浸出,减少蒸煮的时间。(3)多糖的浸提从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大,如用酸处理降低了多糖的含量;用碱处理使多糖量增加,但寡糖含量则相对减少,且提取后液体需中和,程序繁琐;水提取成本低,方便实用,因此在实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水,沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来,然后冷却,将浸提液离心。1)离心与脱色(4)将蒸煮离心,然后加热浓缩,H202加热脱色。(5)除蛋白灵芝子实体蛋白质含量较高,不除去蛋白质,导致粗多糖含量升高,产生偏差,所以在醇析之前,必须除去蛋白质。将脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。(6)多糖的醇析和干燥萃取液中加入乙醇,使多糖与乙醇生成水不溶性化合物,离心,用丙酮漂洗沉淀,除去其中的脂类和色素,然后干燥。除蛋白采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中常含有较多的蛋白质,需要除蛋白。除蛋白的方法传统上有Sevage法、三氯乙酸法、三氟三氯乙烷法等。Sevage法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点,用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1或4∶1,混合物剧烈振摇20~30min,蛋白质变性生成凝胶,离心分离,分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。Sevage法优缺点此种方法只能除去少量蛋白质,须反复多次,多糖有损失,得率不高,且氯仿对人体也有一定毒性,操作时应注意。该法优点是条件温和,可避免多糖的降解。利用蛋白酶可水解蛋白质的特性,在多糖样品溶液中加入一些蛋白质水解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶,再用Sevage法效果更佳。此法不能除去脂蛋白,因为脂蛋白溶于氯仿。多糖纯化超滤法季胺盐沉淀法柱层析法色谱法其他方法纤维素柱层析柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内纤维素平衡好,然后将多糖混合物全部沉淀于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水溶液(如80%,60%,40%,20%)梯度洗脱,则不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是分子量最小的多糖,最终洗脱的是分子量最大的多糖。在洗脱过程中,由于各种多糖在柱上进行无数次的溶解和沉淀过程,最终将各种多糖分离开来。