核酸提取试剂盒优质课件.ppt

试剂盒试剂盒分类核酸提取磁珠法,离心柱法,DNA和RNA,不同样本蛋白检测elisa试剂盒,免疫共沉淀试剂盒,化学发光试剂盒,免疫组化试剂盒,放射免疫试剂盒,免疫荧光试剂盒重金属检测不同重金属离子检测,不同样本中重金属离子检测其他PH检测,污染气体检测等等核酸提取试剂盒核酸核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。 根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸,简称RNA和脱氧核糖核酸,简称DNA。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用,其中转移核糖核酸,简称tRNA。起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称mRNA,是合成蛋白质的模板。核糖体的核糖核酸,简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所。:碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的。:煮沸时将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来,离心沉淀后将杂质去除,上清液即可用作pcr扩增。:利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M氯化纳提取,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。:苯酚作为蛋白变性剂,,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,%乙醇,%,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,,,在提取过程中加入SDS。 :用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。DNA提取方法核酸提取试剂盒离心柱子法柱子磁珠法生物磁珠离心柱试剂盒(细菌)概述本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。该试剂盒提供的方法简单易行,通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在柱材上,避免酚仿抽提。所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。离心柱试剂盒组成离心柱及收集管  各xxx个溶菌酶缓冲液ELBxxxml裂解液GDLxxxml缓冲液GDBxxxml蛋白洗涤液PWB  xxxml洗涤液WB  xxxml蛋白酶Kxxxml洗脱液EBxxxml离心柱操作步骤所有离心步骤皆使用台式离心机,为室温下操作。第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签,在洗涤液WB中加入无水乙醇。(最多提取的细菌数量为2×109个),10,000rpm离心1分钟,弃上清,留细菌沉淀备用。,可以在菌体沉淀中加入200µl裂解液GDL。用吸头吹打几下,充分混匀。,必须要进行溶菌酶破壁处理(如不确定为何种菌属,请按处理革兰氏阳性菌的方法进行)。具体操作如下:称20mg溶菌酶,,取1ml溶菌酶缓冲液ELB,反复吹打几次将溶菌酶完全溶解,配制成溶菌酶裂解液。向细菌沉淀中加入200µl溶菌酶裂解液(未用完的溶菌酶裂解液可保存于‐20℃,以备下次使用),吹打重悬细菌沉淀。37℃破壁处理30分钟以上,一些较难处理的细菌可以延长处理时间。破壁处理完成后便可以将水浴温度调至70℃备用。,补加5µlRNase A溶液,充分混匀。µl蛋白酶K,充分混匀。µl缓冲液GDB充分混匀。加入缓冲液GDB可能会出现白色沉淀,放置于70℃水浴时便会消失。