安捷伦1260高效液相操作规程.doc

安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程            查找资料(最好是外文文献)了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。如果还不清楚样品是什么物质,最起码也应该对其极性进行了解,为选择合适的流动相和固定相打好基础。流动相选择注意事项:1 避免使用高粘度的溶剂作为流动相;2 所选用的流动相一定要与样品相溶;3 各流动相之间可以很好的相溶;固定相选择注意事项:(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS),CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(MethyleneChloride)等。,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。 ,必须达到均匀而无颗粒的状态;2 流动相一定要选用色谱级别的(最好是默克、飞世尔、时联等牌子的),,再用超声波清洗仪脱气处理20-30min;3 在连接柱子和色谱仪之前,阀件或管路一定要清洗干净,(一般用异丙醇将管路清洗)(1)将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中:棕色瓶对应A泵,该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水;B、C、D泵根据需要添加。注:若流动相中有水、乙腈最好现用现处理,不宜放置太长时间。(2)先打开计算机登陆windows操作系统,再将仪器的泵、色谱柱、检测器打开,待计算机界面显示连接好后,双击桌面“联机”图标,进入化学工作站,从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。模块右上角状态灯颜色说明:无色,未开电源或者模块准备就绪黄色,模块未准备就绪绿色,正在进样分析 红色,模块出错所有模块红色,仪器有漏液工作站图形颜色说明: 绿色,模块准备就绪   黄色,模块未准备就绪蓝色,正在进样分析红色,出错或者不能联机 灰色,此模块没启用等度洗脱:直接选择比;梯度洗脱:在中设定好初始比例,再点击,设置一定时间内不同的比例。方法如下:前10min中,A:B=10:90第10-15min中,用B:100%第15-30min,A逐渐增加到20%,B逐渐减少80%。设置:10min,A:B=10:90;, B:100%;15min,A:B=0:100%;30min,A:B=20:80(3)右击四元泵界面:选择“瓶填充”点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积,也可设定低体积关泵。旋开排气阀(逆时针),点击“方法”选项进入泵编辑的画面。将泵的流量设到5ml/min,溶剂A设到100%,打开泵,观察排出管线中的气体,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无其起泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀