葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)检测试剂盒(简易比色法).doc

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介:葡糖-6-磷酸脱氢酶(glucose6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶()。Leagene葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯,后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同时NAPD被还原成NADPH,其反应公式如下:G-6-P+NAPD+→6-PGA+L-NADPH。在上述偶联反应中,NADPH生成速率与样本中酶活性呈正比,通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度升高速率(ΔA/min),升高速率(ΔA/min)与G-6-PD活性呈正比,,直接计算酶的活性单位。100T该试剂盒试剂可以检测50次样本,该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。组成:编号名称TE0085100TStorage试剂(A):样本稀释液100ml-20℃避光试剂(B):G6PDassaybuffer100ml4℃试剂(C):NADP18mg-20℃试剂(D):G-6-P1支-20℃试剂(E):G-6-P稀释液10mlRT使用说明书1份   自备材料:1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备溶血液:取新鲜抗凝血,离心取上清及白细胞层,用4℃预冷的生理盐水洗涤,每次取上清时,务必去除剩余的白细胞层,再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液,4℃保存备用。临用前,以样本稀释液稀释,即为溶血液。4℃保存10h,-20℃保存48h。2、配制NADP储存液:取NADP溶解于G6PDassaybuffer,充分混匀,配制成NADP储存液(18mg/ml),-20℃保存备用。3、配制检测工作液:取NADP储存液和G6PDassaybuffer,按NADP储存液(18mg/ml):G6PDassaybuffer混合,即为检测工作液。-20℃保存,一个月有效。4、配制G-6-P工作液:取G-6-P1支溶解于G-6-P稀释液,混匀,即为G-6-P工作液,分装成小份后,-20℃保存备用。5、分光光度计检测:按照下表设置空白管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。加入物空白管测定管检测工作液(μl)(37℃预温)880880G6PDassaybuffer(μl)20-溶血液(μl)-20混匀,孵育。G-6-P工作液(μl)100100混匀,37℃孵育60s,在340nm处各管吸光度变化,计算各管ΔA/min。   6、生化分析仪检测:按照下表设置主要参数。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。波长340nm反应温度37℃孵育时间90s连续监测时间60