人抗凝血酶抗体(AT-)酶联免疫分析.doc

人抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E08175h检测范围:-50U/ml最低检测限::本试剂盒可检测人anti-thrombinⅢ,且与其他相关抗体无交叉反应。有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中anti-thrombinⅢ含量。:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。,稀释时可在水浴中加温助溶。、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的抗原thrombinⅢ包被微孔板,制成固相载体,往包被thrombinⅢ的微孔中依次加入标本或标准品,洗涤后加入生物素化的thrombinⅢ、HRP标记的亲和素,然后在经过彻底洗涤用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的anti-thrombinⅢ呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制酶联板(Assayplate):一块(96孔)。标准品(Standard):2瓶(冻干品)。样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。生物素标记抗原稀释液(Biotin-conjugateDiluent):1×10ml/瓶。辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。生物素标记抗原(Biotin-conjugate):1×120μl/瓶(1:100)辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。浓洗涤液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。终止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的试剂和器材标准规格酶标仪高速离心机电热恒温培养箱干净的试管和Eppendof管系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6. 蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。细胞培养物上清或其它生物标本:1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为50U/ml,