免疫组化实验步骤.doc

:微波炉格兰仕家用微波炉光学显微镜OLYMPUS显微镜染色缸21个,1000ml烧杯1个,保鲜膜,湿盒试剂:封闭用血清,DAB染液,SABC试剂盒,中性塑胶武汉博士德生物工程公司无水乙醇,甲醇,二甲苯,柠檬酸,柠檬酸钠,盐酸,氨水,氯化钠,氯化钾,磷酸氢二钠,磷酸二氢钾,吐温-20,30%双氧水,苏木素染液试剂配制:×PBS(1000ml):NaCL:40g;KCL:;Na2HPO4:;KH2PO4:,-。使用时稀释5倍至1×使用。×PBST(1000ml):NaCL:40g;KCL:;Na2HPO4:;KH2PO4:,tween-20:,-。使用时稀释5倍至1×使用。:(10mM,):10×储备液配制:柠檬酸溶液::×柠檬酸盐缓冲液,使用时稀释10倍至1×使用。:无水乙醇:取500ml无水乙醇至染色缸中,脱水和复水各3份共需6份95%乙醇:取475ml无水乙醇加25ml水至染色缸中,脱水和复水各3份共需6份70%乙醇:取350ml无水乙醇加150ml水至染色缸中,%盐酸酒精:%酒精1实验步骤:℃-60℃烘烤1-:将烤箱中取出的切片迅速置于二甲苯染色缸中脱蜡3min×:将脱蜡完成后的切片分别置于无水乙醇2min×3次,95%乙醇2min×3次,70%酒精2min;蒸馏水中轻晃漂洗2min。:切片置于10mM柠檬酸盐缓冲液中95℃以上修复,具体时间视不同组织不同切片质量决定。注意不可长时间沸腾,以免导致脱片。实验室现用格兰仕家用微波炉设置条件:取600ml柠檬酸盐缓冲液,power1加热7min后溶液沸腾,调制power60继续加热13min,在power60条件下可保证缓冲液温度达到要求但不长时间沸腾,在加热过程中使用保鲜膜封闭烧杯口并在保鲜膜上用针头扎孔,以免加热过程中缓冲液蒸发导致浓度改变。,ddH2O流水冲洗10min。注意:室温自然冷却,流水冲洗保证柠檬酸盐缓冲液不残留,℃湿盒中封闭1h。℃湿盒过夜孵育。,PBS摇床漂洗5min×℃湿盒孵育20-30min,PBS摇床漂洗5min×%H2O2封闭10min去除内源性过氧化物酶。清水漂洗后PBS3min×3次。注意:3%H2O2现配现用。时间不