根尖分生组织细胞的有丝分裂实验.doc

根尖分生组织细胞的有丝分裂实验一、实验目的1、学习植物根尖压片标本制备方法的基本技术。2、熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体形态和结构上的动态变化,并学会染色体简易永久片的制片技术。二、实验原理有丝分裂是高等动植物体细胞分裂的主要方式,高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点、幼叶等部位的分生组织。在有丝分裂时,细胞核与细胞质有很大的变化,但以细胞核内染色体的变化最为明显,而且是有规律地进行。在有丝分裂过程中,真核细胞的染色质凝集成染色体,每个染色体能复制一份,复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向两极,精确地平均分配到两个子细胞中去,从而使产生得两个子细胞及与其母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。由于染色体上有遗传物质DNA,因而在生物的亲代和子代之间保持了遗传性状的稳定性。染色体的这种特异性、恒定性、连续性和在细胞分裂过程中的正确复制及分配被确认为是遗传物质的载体,是遗传传递规律的细胞学基础。可见,细胞的有丝分裂对于生物的遗传有重要意义。三、实验材料洋葱(Aillumcepa)根尖,蚕豆(Viciafaba)根尖。四、实验器具和药品试剂显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片;Carnoy固定液、改良苯酚品红染色液、-羟基喹啉水溶液、~%秋水仙素溶液、对二氯苯饱和水溶液、1MHCl、加拿大树胶。五、实验方法和步骤(一)材料准备1、培养洋葱根尖选取底盘大的洋葱做生根材料,剥去外层老皮,用刀削去老根,注意不要削掉四周的根芽,将洋葱的鳞基置于盛水的小烧杯(或广口瓶)上,让洋葱的底部接触杯内的水面。把小烧杯放进20~25℃培养箱内培养。培养时注意每天换水1~2次,防止烂根。,在上午九时取健壮的根尖进行预处理。2、种子培养根尖选取蚕豆(或小麦、玉米等)种子放在烧杯中,放清水浸泡过夜,使种子吸水胀大后倒出,再用清水洗几次,用多层纱布包好种子,放进20~25℃培养箱内培养。当根尖长1~,即可以在上午九时取生长旺盛的根尖进行预处理。(二)预处理目的,使获得中期分裂相较多的细胞,使染色体缩短,分散,形态结构稳定,便于压片,有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数。预处理机理:阻止或破坏纺纺锤体微管的形成,使有丝分裂过程被抑制在分裂中期阶段,以便累积较多的处于分裂中期的分裂相;改变细胞质的粘度;导致染色体高度浓缩、变短,利于染色体的分散。在固定之前应用理化因素进行预处理,这样可以,抑制或破坏纺锤丝的形成,促使染色体缩短和分散等。。处理的方法如下:~%,室温下处理3~4小时。对抑制纺锤体活动的效果明显,易于获得较多的中期分裂相,并且染色体收缩较直,有利于对染色体结构的研究。~5小时,对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好,对染色体小而多的植物中,计数染色体制片效果最好。-~,一般认为它将引起细胞粘滞度的改变,进而导致纺锤体活动受阻。通常处理2~4小时,可使中期染色体在赤道面上保持其相应的排列位置,另一优点是处理后的缢痕区较为清晰。,浸入蒸馏水内,放置到1~4℃冰箱中(玉米及水稻6~8℃)处理2