实验三 酵母核酸的制备及成份鉴定.ppt

实验三酵母核糖核酸的提取及组分鉴定(先打开水浴锅,温度设置成100摄氏度)一、目的二、原理三、器材四、试剂和材料五、操作六、注意事项羹衅苏零潜俘极袒崇肆蔚蒋蟹没巩讶本计殿喂诗斡闸处年莹娘叁蛇撬朝律实验三酵母核酸的制备及成份鉴定实验三酵母核酸的制备及成份鉴定一、目的了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法以了解苔黑酚定量测定RNA的方法。疥铡芯蹈灼宿另轨瞪嗡鸿哟私瓮辜废衫矾搏勾绍唱蝶骑陵捷竣吨渔夹凄扳实验三酵母核酸的制备及成份鉴定实验三酵母核酸的制备及成份鉴定二、原理酵母核糖核酸中RNA含量较多,RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,即得到RNA的粗制品。核糖核酸中含有核糖、嘌呤碱,嘧啶碱和磷酸各组分,加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。,磷钼酸中的钼在有还原剂(Vc)存在时可被还原成蓝色的钼蓝。根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。。,后者能与3,5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛,它和二苯胺作用生成蓝色化合物。蔽体砧淆点昭蝶田晌辗胯褐迫魂综错乌青枢灸骨讹汝扇汕盈娘岛腑兑垄滋实验三酵母核酸的制备及成份鉴定实验三酵母核酸的制备及成份鉴定三、器材锥形瓶大研钵电子天平离心机恒温水浴锅注意仪器使用方法离心管平衡!!玉谆债辖提吝埠累筒识祝吉刹言亩袍长樟咆兑纤扎揣阮捉黑牺硫捧舒级形实验三酵母核酸的制备及成份鉴定实验三酵母核酸的制备及成份鉴定四、,95%乙醇,,浓氨水,:30ml95%。苔黑酚--FeCl3溶液:将100mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,,临用时配制。定磷试剂:按顺序以A:B:C:蒸馏水=1:1:1:2(V/V)混匀,现配。A、17%H2SO4: 将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。B、%(NH4)6Mo7O24:(NH4)4Mo2O7溶于100ml蒸馏水中。C、10%Vc:10gVc溶于100ml蒸馏水中,用棕色瓶贮存。颜色呈淡黄色时可以使用,如呈深黄或棕色则失效。奠扦姬帛杯猎疵自脾票左药迁修杖拐墒屑米啮躬擒捧伟鸳痘售拇障练喝港实验三酵母核酸的制备及成份鉴定实验三酵母核酸的制备及成份鉴定五、操作1、酵母RNA的提取(2-3人一份)(先以少量NaOH溶液湿润酵母,并充分研磨),将悬浮液转移到250ml锥形瓶中,在沸水浴30分钟,不时搅拌,冷却后转入离心管进行离心.----(蛋白质变性沉淀,RNA溶于碱性溶液)离心10min(4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇溶液中,待核糖核酸沉淀完全后,离心3min(4000rpm),弃去上清。