植物激素脱落酸(aba)快速检测试剂盒试剂盒使用说明书.doc

植物激素脱落酸(ABA)快速检测试剂盒试剂盒使用说明书产品编号:CSB-E09159Pl检测范围:-200pmol/ml最低检测限::本试剂盒可用于快速检测植物样本中ABA含量。有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定植物组织样本中的ABA含量。:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。,稀释时可在水浴中加温助溶。、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测ABA。微孔板上包被有ABA偶联物。加入ABA抗体和ABA标准品或样品,游离ABA与微量反应板上的ABA结合物竞争结合抗ABA抗体,没有结合的抗体被洗去,再向微孔中加辣根过氧化物酶标记二抗,与结合在反应板上的抗体作用一定时间,洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。再向反应孔中加入相应反应底物TMB,作用一定时间后,结合的酶结合物将TMB转化为蓝色,转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ABA呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。(Assayplate):一块(96孔)。2.  标准品(Standard):2×250ul/瓶。3.  样品稀释液(SampleDiluent):2×20ml/瓶。4.   ABA单克隆抗体:1×60μl/瓶(1:100)5.  辣根过氧化物酶标记二抗(HRP-anti-antibody ):1×120μl/瓶(1:100)6.  底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。7.  浓洗涤液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。8.   终止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. . 离子交换小柱(PCX)6.  氮气吹干仪7. 干净的试管和Eppendof管8. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器9. 蒸馏水,容量瓶等标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:2瓶,每瓶浓度为200pmol/ml,以样品稀释液做系列倍比稀释,分别稀释200pmol/ml,100pmol/ml,50pmol/ml,25pmol/ml,,,。样品稀释液直接作为标准浓度0pmol/ml。ABA抗体和辣根过氧化物酶标记二抗的稀释原则:临用前以样品稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(ABA抗体每孔50ul,辣根过氧化物酶标记二抗每孔100ul),-。如10ulABA抗体和辣根过氧化物酶标记二抗加990ul样品稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。1. 酶联板使用前用洗液洗板2-3次,每次浸泡1-2分钟,250ul/每孔,甩干。2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品50ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,然后在所有孔中加入50ulABA抗体工作液。尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应30分钟(为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液)。3. 温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,250ul/每孔,甩干。4. 所有孔中加入100ul辣根过氧化物酶标记二抗工作液。尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应30分钟5. 温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,250ul/每孔,甩干。6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟内,一般10-15分钟内,此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度蓝色,前3-4孔颜色不明显,即可终止)。7. 依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底