心肌条件性Pellino 1基因敲除小鼠的构建与鉴定.doc


心肌条件性 Pellino 1 基因敲除小鼠的构建
与鉴定#
李建涛1,范敏1,夏薇2,阙玲俐1,李跃华1**
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(1. 南京医科大学基础医学院心血管病分子干预重点实验室,南京 210029;
2. 南京医科大学医药动物实验基地,南京 210029)
摘要:目的:构建心肌条件性 Pellino1 基因敲除小鼠,并进行鉴定和表型分析。方法:利用
同源重组原理构建打靶载体,采用电转导方法将线性化打靶载体转入胚胎干细胞(ES 细胞)。
将正确同源重组的 ES 细胞进行囊胚腔注射,并将其移植至代孕小鼠体内,生育嵌合体小鼠;
嵌合体小鼠和 C57BL/6J 鼠交配繁殖出杂合子,再与 Myh6-cre/Esr1 鼠交配得到 Myh6-cre/Esr1
阳性的 Flox/Flox 鼠,采用 PCR 方法鉴定小鼠的基因型。Myh6-cre/Esr1,Flox/Flox 小鼠注射
他莫昔芬诱导心肌 Pellino1 基因敲除。采用小动物超声分析心肌特异性 Pellino1 敲除小鼠的
心功能,HE 染色与天狼猩红染色观察心肌组织形态结构的变化。结果:成功构建了 Pellino1
同源重组载体,经 PCR 鉴定为阳性;完成 Pellino1 基因打靶及囊胚注射,经鉴定为阳性;
繁育出了 Myh6-cre/Esr1 阳性,Flox/Flox 阳性鼠;在体他莫昔芬诱导心肌 Cre 表达,产生心
肌特异性 Pellino1 敲除小鼠;与野生型小鼠相比,心肌条件性 Pellino1 敲除两周对心脏 EF
值、FS%、IVS、LVPW 无明显影响,而且其心肌形态结构与野生型小鼠相比亦未见明显差
异。结论:成功构建出心肌条件性 Pellino1 基因敲除;Pellino1 心肌特异性敲除两周对心肌形
态结构和心功能无明显影响。
关键词:Pellino1;基因敲除;心肌条件性;心功能
中图分类号:R363
Generation and identification of the conditional cardiac
Pellino1 gene knockout mouse
LI Jiantao1, FAN Min1, XIA Wei2, QUE Lingli1, LI Yuehua1
(1. Key laboratory of cardiovascular disease and molecular intervention,Nanjing Medical
University, Nanjing 210029;
2. Animal experiment center,Nanjing Medical University, Nanjing 210029)
Abstract: Objectives: To generate inducible cardiac conditional Pellino1 knockout mouse, and
identify the phenotype of mouse generated. Methods: The construct of targeting vector was made
by homologous b