细胞融合实验报告.doc

聚乙二醇介导的细胞融合2012年2月19星期一陈倩倩(1)同作者:郑梦璐谢雨后赵松1、文摘细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇(PEG,polyethyleneglycol)诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点,被普遍地应用于生物、遗传、、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈,此外,由于该方法涉及的影响因素较多,。2、背景介绍细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。后来Littlefield用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。1975年英国科学家Milestein和Kohler在体细胞杂交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞(B淋巴细胞)与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇(PEG)或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。该技术被誉为免疫学的一次革命其创建者荣获1984年诺贝尔医学和生理学奖。B细胞杂交瘤可在体外大量培养,也可接种到小鼠腹腔中繁殖。自1975年以来,世界各国科学家采用B细胞杂交瘤技术已制备出万余种单抗,其中绝大部分为小鼠墓抗。所谓单抗就是指培养单个杂交瘤细胞使之无性生殖形成细胞集落(称为克隆),由这些细胞所产生的只能识别和对付一种抗原的特导性抗体就称为单克隆抗体,即单抗。单抗于八十年代处已领尤商品化,现已有百余种诊断试剂和数种治疗剂投放市场。目前,单抗新兴产业正在形成。随着B淋巴细胞杂交瘤技术的建立和发展,B淋巴细抱杂交瘤技术也发展起来了。早在1977年就有T细胞杂交瘤的报道,但有功能的、能分泌各种因子的T细胞杂交瘤的报道则始于1978年,如抗原特异的抑制因子,制造T细胞杂交瘤技术的基本操作过程和B细咆杂交瘤技术相似,只是用于融合的细胞是激活或抗原致敏的T细胞和酶缺陷型的淋巴瘤细胞。目前,由于技术上的限制,T细胞杂交瘤还未能发挥其固有