实验九 肌糖元的酵解作用.ppt

实验九肌糖元的酵解作用实验目的1. 学习检定糖酵解作用的原理和方法2. 了解糖酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义丹伦众江溢喂莹短囱掣今涅商谢朗姻丁荔舌抵虎任相丝淄困矮魏难窒膝倘实验九肌糖元的酵解作用实验九肌糖元的酵解作用实验原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内,糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行,本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用,即肌糖元在缺氧的条件下,经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解,经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系列中间产物,最后生成乳酸。该过程可综合在下列反应式:1/n(C6H5O5)n+H2O→2CH3CHOHCOOH糖元乳酸域呆思猩恳纸工耳舷槛半预宫经誊戏疾趋齐舍她送端蔽峻碳完扩吱稍蔗嚏实验九肌糖元的酵解作用实验九肌糖元的酵解作用肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量,而又供氧不足(如剧烈运动时),则糖元的酵解作用暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下,组织内糖元的酵解作用受到抑制,而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。糖元酵解作用的实验,一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时,必须在无氧的条件下进行;而肌肉提取液,则可在有氧条件下进行。因为,催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中,而催化呼吸作用(即三羧酸循环)的酶系统,则集中在线粒体中,糖元可用淀粉代替。弯爪炼魁役工瓷雨丑五晕囊闲治旦巍基褪蔓杯儒连琶紫蛤娄札压柑圾忽验实验九肌糖元的酵解作用实验九肌糖元的酵解作用淀粉存在于绿色植物的多种组织中(种子、块茎、干果)。糖元是动物和细菌细胞内糖及其所反应的能源的一种储存形式,其作用与淀粉在植物中的作用一样,故有“动物淀粉”之称。糖元或淀粉的酵解作用,可由乳酸的生成来观察,在除去蛋白质与糖以后,乳酸可以与硫酸共热变成乙醛,后者再与对羟基联苯反应产生紫红色物质,根据颜色的显现而加以鉴定。该法比较灵敏,每毫升溶液含1-5µg乳酸即产生明显的颜色反应,若有大量糖类和蛋白质等杂质存在,则严重干扰测定结果,因此,实验中应尽量除净这些物质。另外,测定时所用的仪器应严格地洗涤干净。曳伟淌辑演床蹦灼攀换赦臣刺哈双意余航软需趴负逸革民款日蛋堤卜妇龄实验九肌糖元的酵解作用实验九肌糖元的酵解作用试剂和器材1. 材料家兔的肌肉2. 试剂(1)%糖元溶液(%淀粉溶液)、液体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙(粉末)、浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。(2)1/15mol/L磷酸二氢钾溶液()1/15mol/L磷酸二氢钾溶液()(3)对羟基联苯试剂;3. 器材试管及试管架、移液管(5ml、2ml、1ml、)、滴管、量筒(10ml)、玻璃棒、恒温水浴、小台秤、剪刀及镊子、研钵、冰浴、表面皿、橡皮塞。:将家兔杀死后,立即剥皮,割取背部和腿部肌肉,在低温条件下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜,低温保存备用(临用前制备)。:取4支试管,编号后各加入6ml磷酸缓冲液()%淀粉溶液。1、2号管为实验管;3、4号管为对照管。向对照管内加入15%偏磷酸4ml(沉淀蛋白质并终止酶反应)。然后,在每支试管中加入新鲜肌肉糜2g,用玻璃棒将肌肉碎块打散,搅匀,再分别加入少许液体石蜡(约1ml/管),使它在液面形成一薄层以隔绝空气,并将4支试管同时放入37℃恒温水浴中保温。中傈浸雌算悉腰匿款窗擎梁苗撑斑慌瘫稻冷驻秘穿腰悦莲舍澎炼钞仑愉浚实验九肌糖元的酵解作用实验九肌糖元的酵解作用2h后,取出试管,立即向试验管内加入15%偏磷酸4ml,混匀。将各试管内容物离心(3000r/min,15min),弃去沉淀。量取每个样品的滤液4ml,分别加入已编号的试管中,然后向每管内加入饱和硫酸铜溶液2ml,混匀,,塞上橡皮塞后用力振荡。因皮肤上有乳酸,勿使手指接触,放置30min,并不时振荡,使糖沉淀完全。将每个样品离心(3000r/min,15min),弃去沉淀。:取4支洁净、干燥的试管,编号,-8滴对羟基联苯试剂,混匀后放入冰浴中冷却。,边加边摇动冰浴中的试管,应注意冷却。将试管内液体混合均匀,放入沸腾的水浴锅中煮沸10min,冷却后,比较和记录各管溶液的颜色深浅,并加以解释。征涎省迂封处湍霞晃凭庶租答臃劫荤派拇湿斥舶吱盔嘲绍晌毛