氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯检测试剂盒使用说明书.doc

氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯检测试剂盒使用说明书本试剂盒是适用于各种农产品和环境样品中的低含量氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯检测。1、原理利用间接竞争酶联免疫吸附原理,将菊酯类农药半抗原-蛋白(固定抗原)偶联物包被于聚苯乙烯微量反应板的孔穴中,再加入样品提取液(含游离抗原)和抗体,使固定和游离抗原与抗体进行免疫竞争反应,加入HRP标记的羊抗兔IgG,使在酶标板上形成抗原-抗体-羊抗兔IgG-酶复合物,然后加酶底物显色。颜色的深浅与游离抗原的量成反比。即游离抗原的量越大,颜色越浅;游离抗原的量越小,颜色越深。用酶标仪测定样品的光吸收值,与菊酯类农药标准品作比较来判断样品中菊酯类农药的含量。2、:菊酯类农药半抗原与卵清蛋白OVA的偶联物,50ul/瓶,使用时用包被缓冲液稀释3000倍。:新西兰大白兔经免疫后取血清制备,100ul/瓶,使用时用PBS缓冲液稀释6000倍和样品预混。:四甲基联苯胺(TMB),5mg/瓶。:工作浓度1:10000,。%的过氧化氢。100ul/。(OVA),。以上试剂每套试剂盒各配备一瓶。3、需自行准备的试剂氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯标样4、分析步骤氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯标样配制:将氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯标准品用丙酮配制成10m,g/mL储备液,使用时分别用含有10%、2、1、、、、、0mg/ml的标准溶液。,包被酶标板,每孔100μL,4℃过夜。,并在每孔中加入200μL1%OVA封闭液,37℃温育1小时。,加入不同浓度的氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯标准样品(制作标准曲线)或样品提取液(检测样品中的氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯含量)与抗体溶液的混合液(1:1,每孔100μL,该混合液应于使用前一天配好,4℃过夜备用),37℃温育2小时。。加入酶联葡萄球菌A蛋白,每孔100μL,37℃温育1小时。。快速加入底物溶液,每孔100μL,37℃温育15分钟。,终止反应,每孔50μL,于450nm处测定吸光值。5、结果计算设定对照孔F11、G11、H11孔的OD值的平均值为Bo,1至6列的A、B、C孔的OD值平均值为B(n=l,2,3,4,5,6),同一样品的重复孔的OD值平均值为Byp(yp代表不同的样品)。每组数据都以三次重复的平均值为准。以氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯标样浓度的常用对数log[c]为横坐标(X),对应的抑制率I%=100%[(Bo—Byp)/Bo]为纵坐标(Y),可得一条Y=a+bX直线。将Byp经换算成Yyp,然后代入直线中,可得Xyp,对Xyp取反对数,即可得知样品中氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯含量Cyp。本方法的重复测定结果相对偏差不得超过10%。6、保存本试剂盒中包被抗原和检测抗体需在-20℃下保存,其他试剂保存在4℃,保质期为4-6个月。附注1、:(Na2CO3),