DNA微阵列在结直肠肿瘤的APC基因异常研究中的应用.pdf

东南大学
硕士学位论文
DNA微阵列在结直肠肿瘤的APC基因异常研究中的应用
姓名:高璐
申请学位级别:硕士
专业:生物科学与医学工程
指导教师:陆祖宏;程璐
20040401
摘要我们分别采用了基因芯片方法与际醵訟基因外显子突变进行变样本,突变率为%。根据芯片杂交结果我们可以清楚的判断突变模式并计进行筛查中,经测序验证有槐浞⑸槐渎%,其中胄酒觳镜牟煌谆J剑箍梢越柚ü馇慷缺曜记咄级蕴囟–位点在癌变过程中,基因表达的异常可能通过基因机制和表基因机制。基因机制认为癌变是由于峁发生变化,包括基因缺失突变等引起产生结构异常的基因产物。表基因制目前主要是指奏号位甲基化改变,引起基因表达异常甚至失活。基因失活是结直肠肿瘤发生发展过程中的早期事件,在腺瘤向腺癌转化,尤其是不典型增生性腺瘤的形成过程中起重要作用,对于早期诊断具有重要意义。本课题主要围绕蛲庀宰油槐溆肫舳忧鳦岛的异常甲基化的检测了检测。在基因芯片方法中,我们选取了个突变热点,设计与制备了相应的⒄罅卸嶂背χ琢霰瓯炯罢6哉战辛思觳猓渲屑觳獾例突算得到突变程度。在用际醵訟基因第和宰油槐涿芗结果一致,并且有两例为新的突变。实验结果表明椒ǘ杂谝欢ǚ段的突变筛查更为全面;而基因芯片方法在特定位点突变的检测方面具有优越性,同时基因芯片技术可对多基因多个位点同时检测,且无需测序。对于蚱舳忧囊斐<谆颐且卜直鸩捎昧薓方法与基因芯片方法进行检测。在椒ǘ嶂背χ琢霰瓯镜募觳庵械玫搅%说位点,设计与制备了相应的⒄罅卸嶂背χ琢霰瓯及正常对照进行了检测,检出甲基化发生率为.,渲隡结果一致。两种方法的检测结果比较说明了结直肠肿瘤中蚱舳忧在不同的甲基化模式。通过芯片杂交结果的数据分析不仅可以定性的阐明每例的甲基化水平进行定量分析。实验表明基因芯片方法不仅在甲基化检出率方面优于ǎ其对不同甲基化模式的分析也是ㄋ患暗摹而展开。的甲基化发生率。在基因芯片方法中我们选取了蚱舳忧关键词:颉⑼槐洹⒓谆⒒蛐酒⒏咝б合嗌住⒓谆匾煨訮东南人学硕上学位论文
甒瓼%%%、猦—·一....瓵—痳,东南大学硕士学位论文
甅琈,篈—産..—猲东南大学硕士学位论文
研究生签名:南溉虽壶日期:.业主:≥东南大学学位论文独创性声明东南大学学位论文使用授权声明研究生签名:导师签名:期本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得东南大学或其它教育贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布ǹ论文的全部或部分内容。论文的公布ǹ授权东南大学研究生院办理。。.
⒌脑靥澹毯啪薮蟮男畔⒘俊A私夂吞剿髡庑┬畔的生物学含义对人类有着十分重要的意义。人类基因组计划完成了人类基因组总长诟黾罨缘娜蛄械牟舛ǎ颂迦ú蚋鲎笥一因结构,以及人体基因图谱将在年确定,它提供了一个广泛的平台,使人们能够在此基础上解释和阐明人类遗传物质的结构和功能。此时科学家们迫切需要建立一种高效、准确、自动的遗传信息分析系统以研究成千上万个基因在各种生理、病理状态下的表达,预测发现它墓δ埽⒈婷魉羌涞南嗷プ鱛干偷骺氐墓叵怠;孕酒际蹙褪窃谡庵背最下诞生的。基冈芯片殖艱微阵列墙ǚ肿由学、生物信息学与微/工技术交叉结合所得到的可以实现基因信息的大规模检测新技术。基因芯片的诞生对遗传学变革的推动作用,甚至会超过“人类基因组计划”。基冈芯片又称⒄罅校且恢治⑿投嗖问锎ǜ衅鳎嵌嘌Э平徊娴牟铩;因芯片最早由甋晏岢鯥”,经过十多年的发展已成为是兰蜕锕程的重要组成部分。它通过使用半导体工业中的微加工、,然后与标记的靶序列杂交,利用生物大分子慕峁辜捌浼罨涠栽颍允迪侄院怂岱子中基因片段准确、快速、大信息量的检测。基因芯片的髟碛刖涞暮怂岱肿釉咏环椒且恢碌模际怯Ω蘸怂嵝蛄凶魑L秸胗牖ゲ沟陌行蛄性咏唬ü婧蟮男藕偶测进行定性与定量分析咧。但与传统核酸印迹杂交方法相比,基因芯片技术绝不仅仅是改变了载体和检测步骤,而最本质的改变在于基因芯片是将大量按靶基因的特征及检测要求预先设计的探针固化在支持物表面。一次杂交可检测样品中多种靶基因的相关信息,使基因芯片技术具有了高通量,高精度,高灵敏度,快速自动等显著的特点【。”。基因