hBMP-4基因修饰的组织工程化骨的实验研究.pdf

上海对外贸易学院
博士学位论文
hBMP-4基因修饰的组织工程化骨的实验研究
姓名:蒋欣泉
申请学位级别:博士
专业:口腔临床医学(口腔颌面外科学)
指导教师:张志愿

..蛐奘蔚淖橹こ袒堑氖笛檠芯卵白素一生物素一过氧化物碱性磷酸酶氨苄青霉素二氨基联苯胺胎牛血清苏木索一伊红卡那霉素骨髓基质干细胞骨钙素光密度磷酸缓冲盐溶液十二烷基硫酸钠转化生长因子切口末端标记酶复合物骨形成蛋白二甲基亚砜乙二胺四乙酸天然型无机骨重组人骨形成蛋白—.’痵
.蛐奘蔚淖橹こ袒堑氖笛檠芯中文摘要组织工程的基本方法是通过穿刺或活检取得少量的组织细胞,体体骨移植具有最佳的治疗效果,然而自体骨来源有限,并会对患者造成新的缺损;异体骨具有一定的免疫原性,并且存在病原体感染的潜的骨缺损修复方法。利用组织工程技术构建骨组织为颌面部骨缺损的修复提供了新的思路。外培养扩增,取得足够数量的种子细胞后,接种于生物材料中形成复合物,植入体内,以修复缺损。骨髓基质干细胞哂欣丛丰富,采集方便的优点,在体外培养、诱导、扩增可获得大量具有成骨细胞表型的种子细胞。作为同源细胞治疗,无免疫原性,宜于自体骨形成蛋白属于瓸超家族,其中、等均有明确的独立诱导成骨能力。传统方法直接应用岩员3志植颗ǘ龋价格昂贵,大量使用存在毒性及免疫原性。蛑瘟凭哂星痹的优越性。于首先克隆了、颍9侨彼鹦复的蛑瘟频於嘶基因治疗正成为骨科研究的热本实验选择了较为安全的基因转染方式,,转染体外培养的觳饣虻淖H拘剩康幕的转录和表达,以及对镅形5挠跋臁2⒂胩烊恍臀藁骨Ъ芨春希菇╤蛐奘蔚淖橹こ袒牵骨缺损的修复是口腔颌面外科亟待解决的重要课题。临床上,自在可能性;而人工合成聚合物,天然生物材料等多种骨替代材料虽然被广泛应用,但大多缺乏骨诱导能力,所以学者们仍然致力于寻找新回植,是组织工程化骨理想的种子细胞。点。.基因修饰的组织工程化骨的实验研究
甴基因修饰的组织工程化骨的构建及其体内植入试验性克隆序列经测序证实完全正确后,亚克隆入婧吮泶镌靥澹应用ɑ竦胔全长基因,进行狝克隆。经测序确认序列完全正确后,亚克隆入婧吮泶镌靥澹菇╤行裸鼠体内及兔自体下颌骨部分缺损修复的研究,试图利用因治疗与组织工程技术相结合,为骨缺损提供理想的修复方法。甴真核表达质粒的构建及鉴定真核表达质粒,进一步酶切检验。甴基因转染乃彩北泶锛觳贴壁法培养兔逋庥τ胠进行基因转染,通过对照基因的绿色荧光表达检测转染效率。—⒚,土魇较赴剖觳庀赴牡蛲觯钚粤姿崦⒏平峤凇⒐歉扑觳獬晒窍赴谋硇汀度与Ъ芨春希菇ㄗ橹こ袒牵逋饨猩璧缇倒鄄臁植入裸鼠体内,潞蠼凶橹鹿浅晒敲婊治觥以基因修饰的组织工程化骨修复兔下颌骨糠秩损,术后隆月取材,行大体及组织学观察,并对卤瓯拘行骨成骨面积定量分析及生物力学检测。 Q谟呕淖H咎跫绿逋庾H就胋,转染效率达%。—砻鱞本身有的转录,转染目的基因后转录增本实验进行了以下几个方面的工作:体外转染基因后,观察细胞的形态变化,杌嫦赴纳转染目的基因的细胞与对照组细胞分别以/的密取得的结果成功构建了甴表达载体。基因修饰的组织工程化骨的实验研究
强。。转染目的基因后泶镌銮浚平峤谑吭黾樱琌泶産可以在Ъ芡啄诒砻嫣谏ぃ橹嗳菪好。⒐侨彼鸬男薷匆踩〉昧讼嗨频慕峁后聀—...榇笥从上述实验可以得到以下结论:强寺》ü菇ǖ膆真核表达质粒,在优化的转染条件下可以获得较高的转染效率,目的基因的转录和表达增强。逋饣蜃H竞蠖韵赴脑鲋澈偷蛲雒挥忻飨杂跋欤琱基因转染诱导细胞向成骨细胞方向分化。、对照基因及哉兆橄赴牡蛲雎示系停挥忻飨较为安全和有效的骨组织替代物。关键词:组织工程骨形成蛋白骨髓基质干细胞基因治疗天然型无机骨的基因的表达。增强。。..蛐奘蔚淖橹こ袒堑氖笛檠芯
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.蛐奘蔚淖橹こ袒堑氖笛檠芯前言速缺损的修复。组织工程化骨的构成主要有种子细胞、支架材料,并通