盘羊、巴什拜羊及其杂交羊类泛素ISG15基因的功能研究.pdf

StudyStudyStudyStudyononononFunctionFunctionFunctionFunctionininininUUUUbiquitin-likebiquitin-likebiquitin-likebiquitin-likeISG15ISG15ISG15ISG15GeneGeneGeneGeneofofofofArgali,Argali,Argali,Argali,BashibaiBashibaiBashibaiBashibaiSSSSheepheepheepheepandandandandTheirTheirTheirTheirHybridHybridHybridHybridSSSSheepheepheepheepADissertationSubmittedtoShiheziShiheziShiheziShiheziUniversityUniversityUniversityUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterMasterMasterMasterofofofofAgricultureAgricultureAgricultureAgricultureByHaifuHaifuHaifuHaifu----lulululu((((linicVeterinaryVeterinaryVeterinaryVeterinary))))DissertationSupervisor:-mingMay,2013ShiheziXinjiangChina本研究受国家自然科学基金资助项目----《类泛素蛋白ISG15ISG15ISG15ISG15在盘羊、巴什拜羊及其杂交种的疾病抗性研究》(NONONONO:31060351310603513106035131060351)资助。ThisresearchissurpportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChinanamedbyThediseaseresistancestudyofubiquitin-likeproteinISG15inArgali,Bashibaisheepandtheirhybridsheep(NONONONO:31060351310603513106035131060351).石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名:时间:年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名:时间:年月日导师签名:时间:年月日I摘要盘羊(Ovisammon)属于国家二级保护动物,具有较强的抗病力,而其杂交后代羊表现出抗病力弱,推测杂交羊抗病力弱可能与某些抗病基因变异相关。类泛素基因ISG15是疾病相关抗性基因的一种,在机体先天性免疫方面发挥着重要的作用。因此,推测可能由于ISG15基因变异而导致杂交羊先天性免疫降低。目的:本研究通过表达盘羊、巴什拜羊及其杂交羊的ISG15基因,研究重组ISG15蛋白对淋巴细胞增殖、凋亡的影响及对体外支原体感染的影响,比较父母代羊及杂交羊之间ISG15表达水平的差异,以揭示类泛素蛋白ISG15的功能,阐明其在疾病抗性中的作用。方法:(1)盘羊、巴什拜羊及其杂交羊ISG15基因的真核表达:首先从重组克隆载体pMD18-T-ISG15中扩增出盘羊、巴什拜羊及其杂交羊的ISG15基因,将以上三种羊的ISG15基因分别亚克隆到巴斯德毕赤酵母pPIC9K表达载体中,再分别将重组质粒通过电击转化入巴斯德毕赤酵母GS115菌株,利用PCR方法鉴定出阳性转化子,%甲醇诱导重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达蛋白;最后利用SDS-PAGE验证蛋白表达。(2)盘羊、巴什拜羊及其杂交羊类泛素ISG15基因的表达产物的纯化:对三种羊重组类泛素ISG15蛋白采用Ni2+螯合亲和层析法进行纯化,利用SDS-PAGE对纯化产物进行检测。(3