rtSH3p13蛋白对细胞增殖的影响及其与RSD-9蛋白相互作用的研究.pdf

中国协和医科大学
博士学位论文
rtSH3p13蛋白对细胞增殖的影响及其与RSD-9蛋白相互作用的研
究
姓名:乐秀宁
申请学位级别:博士
专业:生化及分子生物学
指导教师:王琳芳;缪时英

中文摘要精子发生是指成年雄性动物产生成熟精子细胞的过程,是生殖生物学的一个重大课题,是生命周期中的一个重要环节,也是一个特殊的细胞分化过程。在这一过程中发生了许多其它体细胞分化过程中所没有的特殊现象,最典型的是精子发生早期的减数分裂以及后期的变态成形。减数分裂使四倍体的初级精母细胞变为单倍体遗传物质的精子细胞,变态过程则使圆形的精子细胞分化为具有头、颈、尾特殊结构的精子。哺乳动物的精子发生是由许多相互作用的基因经复杂的调节而完成的细胞分化过程。这些相互关联的基因在精子发生这个复杂的过程中,表达受到严格的时间、空间调控。而众多阶段特异性基因的转录和表达则是形成生精细胞阶段特异性结构及发挥特定细胞功能的基础。近年来,许多科学家致力于精子发生相关基因的研究,越来越多的基因被发现和克隆。人们正在逐渐了解精子形成过程中,从精原细胞有丝分裂到精子细胞变形,并产生顶体和鞭毛等一系列精子发生事件的分子机制。随着基因组工程进入功能基因组时代,目前的精子发生研究需要从蛋白质水平研究这些基因在精子发生过程中合成动态及分布,并通过各种生物学技术干扰基因的正常功能后,观察对精子发生的影响,从而阐明这些基因在精子发生过程中的确切功能。本实验室在过去多年工作中,致力于研究精子发生过程中的差异表达基因,至今已经获得了一系列新基因。基因就是本实验室采用曲细精管分段分离结合技术,筛选、克中国叭和医科大学临床医学专业毕业论文【中文摘要】
隆、鉴定的一个精子细胞特异的差异性表达的新基因。该基因全长为,编码一个含霭被岬牡鞍字剩竦肎接受号为。本组前期的工作对基因进行了较深入的研究。结果显示,基因的表达具有组织特异性霰泶镉诖笫筘和枳橹泻湍宰橹和睾丸发育阶段特异性霰泶镉诔赡甏笫蟮呢和。用抗抗体进行蛋白在睾丸组织的免疫组织化学研究的结果显示,在处于不同发育阶段的各级精子细胞中,仅在第兜毒酉赴杏蛋白的表达。免疫电镜结果显示,蛋白定位于精子细胞的顶体区。运用细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术分别在赴蜕赴泄鄄斓絩鞍子肽谕滔喙氐鞍壮现共定位。此外,我们发现蛋白分布于精子发生各个阶段的精子细胞的处于不同形成阶段的顶体区,说明该蛋白质可能参与了项体的形成。根据竞争性抑制的原理,发现的区和牡鞍妆还泶镆院螅珻细胞中的介导的内吞这些研究结果表明蛋白在生精细胞中参与了网格蛋白复合体介导的蛋白质转运过程,其功能对于生精细胞中的内吞过程以及顶体形成过程至关重要。对于基因功能的深入研究将有助于揭示生精细胞中囊泡转运的分子生物学机制。在此基础上,我们运用致死剂量抗生素筛选瞬时转染细胞的方法获得了稳定表达蛋白的细胞株。建立了基因在赴械奈榷ū泶锵赴怠2⒁愿孟赴滴;。一步研究对细胞增殖等细胞功能的影响。通过对稳定表过程被阻断。中国阱和医科人学临床医学专业毕业沦文【中文摘要】
达细胞系的生长曲线的测定,发现基因具有促进细胞增殖的作用,并且这一作用依赖于血清内成分的存在。我们推测这一现象与生长因子及其相关的信号通路的作用有联系。用酵母双杂交的方法发现的又一精子发生相关基因之一。该基因全长为,编码一个含霭被岬牡鞍字剩竦肎接受号为。至今对其在男性生殖系统睾丸组织的精子发生过程中的作用尚未见任何报道。采用砑隚数据库进行同源性比对发现蛋白含有一个区,我们推测蛋白可能与蛋白共同参与了精子细胞中网格蛋白复合体的功能,并在其中发挥相关作用。为了验证这一设想,需要检测鞍资欠裼雛鞍追⑸嗷プ饔谩在实验中我们综合应用了笛椤⒌鞍字试谙赴的荧光共定位实验等一系列验证蛋白质相互作用的方法,证实了我们的设想。即籒潜咀槔中国协和医科大学临床医学专业毕业论文【中文摘要
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也是一个特殊的细胞分化过程。在这一过程中发生了许多其它体细胞分化过程中所没有的特殊现象,最典型的是精子发生早精母细胞变为单倍体遗传物质的精子细胞,变态过程则使圆形的精子发生是由许多相互作用的基因经复杂的调节而完成的细胞分化过程。这些相互关联的基因在精子发生这个复杂的过程的转录和表达则是形成生精细胞阶段特异性结构及发挥特定细胞功能的基础。近年来,许多科学家致力于精子发生相关基因的研究,越来越多的基因被发现和克隆。人们正在逐渐了解精子形成过程中,从精原细胞有丝分裂到精子细胞变形,并产生顶体和鞭毛等一系列精子发生事件的分子机制。随着基因组工程进入功能基因组时