交联血管紧张素转化酶聚集体的制备及其应用.pdf

中文摘要血管紧张素转化酶(,ACE)在血压调节系统中起着重要的作用。ACEfl皂催化水解血管紧张素I转化为血管紧张素II,并能使血管活性多肽缓激肽失活,从而导致血压升高。游离ACE纯化制备过程复杂且稳定性差、难以回收、重复利用性差,商品化ACE价格昂贵。因此,在实际应用中常将其固定化于适宜的载体上制备出固定化ACE,以提高ACE的稳定性及重复利用性。但载体的存在会“稀释酶活”,因此有必要发展一种无载体固定化ACE的方法。抑制ACE的活性可以降低血压。目前,治疗高血压的药物主要是合成的ACE抑制剂(ACEI)。但合成ACEI禹J]作用大,因此,研究者们将目光锁定低毒副作用的中药,希望能发现潜在的ACEI。但中药成分过于复杂,建立高通量筛选中药中ACEI的方法是发现新型降压药物的重、难点。本文就ACE的无载体固定化,固定化后ACE的活性调节及在中药中筛选ACEI的应用等方面做了以下的研究:(1)制备了交联血管紧张素转化酶聚集体(),,包括最适酶促反应温度、最适pH、‰、‰觚、温度稳定性及pH稳定性等。以酶活力回收率为参考,:饱和度为80%的(NH4)2S04溶液作为沉淀剂、、%的戊二醛作为交联剂、交联时问1h。通过比较酶学性质发现,}L游离ACE具有更好的温度稳定性)fZpH稳定性,且与游离ACE接近的%(2),分别考察了在聚集过程中加入牛血清蛋白(BSA)作为氨基保护剂,在交联时改用京尼平作为交联剂,在聚集体制备完成后用甲胺进行“后处理",在酶活测定过程中考察一价阴离子的影响。,对酶活影响较小。(3)测定了15种中药煎煮液的指纹图谱,并基于第二章制备的ACE—CLEAs,,对筛选出来的8种具有吸附差异性的中药,。探讨了吸附差异性和抑制活性之间的关系,并与己报道的文献进行比较。为从中药中快速筛选出天然ACEI类降压药物提供参考。关键词:血管紧张素转化酶;固定化;交联酶聚集体;活性;抑制剂;筛选;中药ABSTRACTAngiotensinconvertingenzyme(ACE),’,--’mostoftheACEinhibitors(ACEI),investigatorsarepayattentiontothetraditionalchinesemedicines(TCM),aseriesofstudieswereconducted,aboutthepreparation,activityregulationandapplicationof