生物检测PCR技术-课件PPT（精）.ppt

生物技术教研室:郑鸣目录?PCR技术简史?PCR的原理?PCR的反应条件?PCR的类型和应用PCR技术简史?DNA的复制?核酸体外扩增的设想?TAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’解旋酶解链酶DNA解旋解链合成引物子链延长PCR技术简史?DNA的复制?核酸体外扩增的设想?TAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘引物酶引物酶RNA引物RNA引物PCR技术简史?DNA的复制?核酸体外扩增的设想?TAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘TAGCGCTATCGCATCGACGCT3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3’DNA聚合酶DNA聚合酶PCR技术简史?DNA的复制?核酸体外扩增的设想?聚合酶链反应的发明?1971年,Khorana提出:经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。?但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了……PCR技术简史?DNA的复制?核酸体外扩增的设想?聚合酶链反应的发明?1985年,美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应(PCR)?基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制?最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR,由于该酶不耐热,使这一过程耗时,费力,且易出错?耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行,随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪?1993年,Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖Kary B. MullisKary B. Mullis<<The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction>><<The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction>>?1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。?PCR只是一个简单的不起眼玩艺。——凯利·穆利斯(Kary Mullis)?我不认为PCR能够用两种“革命”(政治革命和科学革命)加以说明。……它的发明并没有改变基因操作的本质。有了PCR,我们能在更广的范围内更快、更容易地进行基因操作,学术界也完全不用等到某人死去或退休后才能接受PCR。它只不过是一种新工具。——凯利·穆利斯(Kary Mullis)生物样品DNA片段基因诊断基因治疗基因工程产品法医学检测人类学研究基因组DNA获取特定DNA片段扩增特定DNA片段