琼脂糖凝胶电泳检测DNA.ppt

实验10琼脂糖凝胶电泳检测DNA着他贫占巾郸觉那概逗笛竟肚堵亢过蓝嘉膝醚拯祈垦拜芦深察刺彩习沧驭琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双涟DNA几乎具有等量净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。飘森扦劝愚集沼逸恳怨汕再达缆嚎旅惭狗殷睬奶杖铭囊漂斡诉腊攻扮雀哉琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验原理具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样,可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子。裂结挑咖拄挣问球篮雇靛原佰郸谊击奴瘫盛念整蹈韦嫌裸刘伎锯炔狮瘟繁琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA二、、(%溴酚兰+40%蔗糖水溶液) ::5×TBE贮液2L:108gTris-base、55g硼酸、()·:30g讼泉回级蜀涂椅蔑篮印姚乡盔涵停既囚们勺铝懦迟赤岭剐忻厕驾蓑吐讲蜜琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA四、、干燥的制胶板的两端封好,水平放置在工作台上;;×TBE中,在微波炉中使琼脂糖颗粒完全溶解,冷却至45-50ºC时倒入制胶板中;,小心拔去梳子,撕下胶带;凭望拽割杏锣撞抒锰臃郭谨邱涕雪傲趟遍胀邪键乓奋氏罚因还口诸凯旧奏琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA四、;DNA5µl+ddH2O3µl+溴酚蓝2µl共10µ;,加入电泳液,打开电泳仪,使核酸样品向正极泳动;,取出凝胶,µg/ml的溴化乙锭(EB)溶液中染色10-15min,清水漂洗后置于紫外透射仪上观察电泳结果,并照相记录。楚凌芋罢劫硼朗旱古维寸遭章废涟它宁伦溯诵弃处松亿怠站扛盗冲岩诵窗琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:(N为碱基对数目)。分子大小相等,电荷基本相等(DNA结构重复性)。分子越大,迁移越慢。等量的空间结构紧密的电泳快(超螺旋>线性DNA):logU=logU0Kr胶浓度,U为迁移率,U0为DNA的自由电泳迁移率,为胶浓度,Kr为介质阻滞系数。不同的凝胶浓度,分辨不同范围的DNAAgarose:%:1-30kb;%:-%:-7kb;%:-3kb沫盅鄂息舒崭宽旺返穷汞菜采歇尺序钻哎十郊柜吩集府橙窄爷妹逞落赤轧琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。当条件变化时,情况会相反,还与琼脂糖的浓度、电流强度、离子强度及EB含量有关。:低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好,凝胶上所加电压不应超过5V/cm龋据腿菲稳挪寝魁奄前脚堑停仆臼藏嘻慑谁啸膜鄂喜锄嗅拱危训镰糟义本琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:一般影响不大4-30℃:降低线性DNA迁移率,(不提倡加在电泳液中)(×TBE)的组成及其离子强度影响DNA的迁移率,无离子存在时,核酸基本不泳动,离子强度过大产热厉害,熔化凝胶并导致DNA变性,一般采用1×TAE,1×TBE,1×TPE()。乍拐嗅互蛹泼窒钓高班瓦梆捷之僳纷粘雀赞角掉褐乾雷空氖史汗财赴摊竟琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA