透析袋的使用方法.doc

透析袋在使用前如何处理透析已成为生物化学实验室最简便最常见的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。一般是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,一般是4℃透析,升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素(再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,当前常见的是美国美国光谱医学公司(spectrum,上海欧韦达仪器科技有限公司是中华区特约总经销)和美国UnionCarbide(联合碳化物公司,上海欧韦达仪器科技有限公司是华东区特约经销商)生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)大概有100、500、1000、、3500、8000、10000、15000、0、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。 商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm~77mm不等。为防干裂,出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去。透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜,当前常见的是美国UnionCarbide(联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量)一般为1万左右。截留分子量越大也就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留的分子越小要求透析袋越密,价格越贵。 透析袋使用前处理:(10-20cm)的小段。 %(W/V)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA()中将透析袋煮沸10分钟。 。 ()中将之煮沸10分钟。 前处理也能够将透析袋放在广口瓶中充满水,松动瓶盖,于20psi()高压灭菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。 ,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。若长时间不用,可加少量叠氮钠NaN2,以防长菌。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 ,将之清洗干净。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。这样做能够保证透析袋有良好的透析效果。,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。 :透析袋不推荐重复使用,如果要重复使用就是用之前怎么处理的,用后也怎么处理。。即使是可再生的也请使用于同种蛋白,避免交叉污染。,可用去离子水洗净后,浸泡于20%乙醇溶液中,使用时务必将乙醇洗净。:.用生理盐水浸泡以去掉蛋白,并用蒸馏水清洗干净,然后置于50%乙醇中保存即可美国美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的,即用型,使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用,spectra/por7系列和生物技术级的透析袋基本不含硫化物和重金属离子。使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也能够使用特制的透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,一般要留三分之一至一半的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%是正常的。为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些,能够使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析,可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。 检查透析效果的方法是:用1%BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3检查NaCl、KCl等。  透析纳米颗粒带有机溶剂的,如何处理透析袋重复使用?先看是美国光谱医学的还是美国联合碳化的透析袋?美国公司的方法都不一样的。大多数先用50%乙醇煮沸1小时,再依次用50%