溶菌酶的提取分离和纯化实验报告.doc

生物工程综合实验溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定实验报告集班级生工1411学号组别7姓名实验室学生守则一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施,服从教师及实验技术人员的指导。二、严格按照实验要求,做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室,及时、准确地完成实验任务,实事求是地完成实验报告,杜绝弄虚作假。三、严格执行操作规定,爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操作引起仪器、设备损坏者,应予赔偿。四、爱护实验室公共财物,节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪动非实验需用的其它仪器,不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室外。五、持实验室的严肃安静,不得大声喧哗、嘻闹,严禁在实验室内抽烟和吃东西。六、严防事故,确保实验室安全,发现异常情况,应及时向有关教师和管理人员报告。七、每次实验结束后,主动整理好仪器设备,归还所借器材,关闭电源、水源,按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作,经指导老师许可后,方可离开。预习报告(手写,可自行续页)名称溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定实验目的和要求:实验材料:主要仪器:主要步骤:教师签名:时间:实验报告溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定一、目的对从鸡蛋清中提取并分离纯化出溶菌酶进行活性测定二、原理鸡蛋是溶菌酶的主要来源,~11,最适温度50℃,最适pH为6~7左右。1、溶菌酶分离纯化原理:(1)等电点法利用溶菌酶等电点较高,在酸性条件下除去一些杂蛋白(2)阳离子树脂柱层析法进一步除去杂蛋白2、溶菌酶鉴定分析(1)考马斯亮蓝法测蛋白含量(2)分光光度法测定酶活性(3)使用SDS-PAGE鉴定溶菌酶纯度三、实验材料与方法1、实验材料与试剂鸡蛋清,PBS缓冲液,40%甘油、冰醋酸、氢氧化钠,D152大孔弱酸性阳离子交换树脂、透析袋,考马斯亮蓝G250、牛血清蛋白、乙醇、磷酸,溶菌酶标准品、底物微球菌粉,蛋白质分子量Marker、SDS、聚乙二醇-0等2、实验仪器低速离心机、高速冷冻离心机、离心管、分光光度计,玻璃层析柱,Bio-Rad垂直电泳系统,移液枪、移液管,培养皿、玻璃棒、普通漏斗、滤纸、量筒、刻度试管及试管架、冰箱、摇床、烧杯、止水夹等。3、(1)D152树脂处理(2)湿装法装柱(3)上柱离子交换吸附(4)冲平(5)(1)透析除盐(2)(SDS凝胶电泳)四、实验结果与分析:(1)(mL)(mL)(mL)444444蛋白质含量(μg/mL)(2)待测样品蛋白浓度测定管号E1E2E3E4蛋白质待测样品提取液(mL)(mL)(mL)(μg/mL):由图中数据与制作的蛋白质标准曲线的样品比较可知,经过处理后,E1,E2的蛋白质的含量的数值急剧下降