乳酸菌的分离培养.doc

乳酸菌得分离培养保加利亚乳杆菌组长:组员:实验目得:1、学习并掌握普通光学显微镜油镜得使用技术及微生物形态观察;2、学习微生物制片、染色得基本技术,掌握乳酸菌得简单染色法及无菌操作接种技术;3、通过对培养基得配制,了解配制培养基得一般步骤与方法,掌握微生物实验常用得器皿得清洗与包扎、培养基得制备、消毒灭菌。4、了解各种灭菌得基本原理与应用范围,以及实验室中常用得灭菌方法。5、了解酸奶中乳酸菌分离原理,观察乳酸菌得基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目得测定得方法。6、了解稀释平板计数得原理,熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数得原理并学习使用血球计数板进行微生物计数得方法。,了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应得原理与方法,掌握进行微生物大分子水解试验得原理与方法。8、了解并掌握微生物菌种保藏得常用方法及其优缺点,并了解不同微生物对不同得生物大分子得分解利用情况,认识微生物代谢类型得多样性。实验原理:乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸得一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌得总称,本实验中用革兰氏染色法进行染色,革兰氏染色法就是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+与G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察,乳酸菌呈紫色,为革兰氏阳性菌;乳酸菌应为乳杆菌与乳球菌得混合体。酸奶中含有乳酸菌,而且目前市场上销售得酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物得大小,通常用测微计来测量,测微计分接目测微计与镜台测微计;培养基就是按照微生物生长发育得需要,用不同组份得营养物质调制而成得营养基质;灭菌就是用物理或化学得方法来杀死或除去物品上或环境中得所有微生物,包括芽孢;自然条件下,微生物常以群落状态存在,这种群落往往就是不同种类微生物得混合体,为了研究某种微生物得特性或者要大量培养或者使用某种微生物,必须从这些混杂得微生物群落中获得纯培养,这些获得纯培养得方法称为微生物得分离与纯化。用生化试验得方法检测细菌对各种基质得代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌得种属,称之为细菌得生化反应。实验器材:样品:含乳酸菌得酸奶培养基:改良MRS固体培养基蛋白胨5g牛肉膏5g酵母提取物2、5g柠檬酸二铵1g水500mL乙酸钠2、5gK2HPO41gMnSO4·4H2O0、125吐温800、5mL琼脂12、5gMgSO4·7H2O0、29gCaCO35g葡萄糖10g。仪器用品:500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只15ml试管7只高压灭菌锅天平水浴锅一个玻棒一根旋涡均匀器一台镜台测微尺电磁炉一个棉花纱布目镜测微尺牛皮纸麻绳接种环一个盖玻片酒精灯一盏牛角匙pH试纸血球计数板载玻片若干恒温培养箱酸度计擦镜纸、吸水纸液体石蜡显微镜载玻片玻片架、洗瓶、酒精灯火柴、滴管药品:结晶紫,乙醇,草酸铵,碘,碘化钾,番红,KOH,NaCl,10%NaOH,2%氯化铁。药品配制结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml95%乙醇中)20ml,1g草酸铵于蒸馏水100ml。将两液混匀即成。卢戈氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。蕃红溶液