痰抗酸杆菌的荧光染色法.ppt

,而荧光素金胺O是一种含有自由氨基的金黄色碱性染料,它的离子带有阳电荷,因此金胺O能和带阴电荷的抗酸杆菌结合而使其着荧光色素,当其遇到紫外线或青色线时,即可激发出桔黄色荧光。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(一)涂片①取经95%乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻片,于玻片磨砂端用铅笔在背面左端1/3标注实验编号和序号;②在生物安全柜内,小心打开标本容器,用折断的竹签(需事先准备好)茬端挑取痰标本的脓样、干酪样部分,于玻片右侧2/3处均匀涂抹成10×20mm卵圆形痰膜,待自然干燥。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(二),痰片间距应大于10mm,火焰固定(5秒钟火焰在玻片下方通过4次);%金胺O染液,盖满痰膜,保持染色15分钟。染色时应始终保持痰膜被染色液覆盖,必要时可续加染色液。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(二),洗去染色液后倾斜玻片沥去残余水;(3%盐酸乙醇),脱色3分钟或至痰膜无色;,如果脱色不彻底,重复脱色操作;.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(二);%高锰酸钾复染液,保持染色1~4分钟(根据试剂说明书或经验);流水自玻片上端轻洗,洗去复染液,沥去残余水,待自然干燥。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(三)镜检和报告使用汞光源灯或LED光源的荧光显微镜,用10×目镜,20×物镜观察,发现疑似抗酸菌的杆状物,转用40×物镜确认。在黑暗背景下,抗酸杆菌呈黄色绿荧光,杆状略弯曲。按下列标准报告结果::连续观察50个视野,未发现抗酸杆菌。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(三)镜检和报告2. 抗酸杆菌(1~9条):1~9条抗酸杆菌/50个视野(报告抗酸杆菌数)。3. 抗酸杆菌阳性(1+):10~49条抗酸杆菌/50个视野。4. 抗酸杆菌阳性(2+):1~9条抗酸杆菌/每视野。.抗酸杆菌荧光染色检查操作程序(三)镜检和报告5. 抗酸杆菌阳性(3+):10~99条抗酸杆菌/每视野。6. 抗酸杆菌阳性(4+):≥100条抗酸杆菌/每视野。镜检结果应及时记录在“结核病细菌学实验室登记本”和检验报告单上。.