培养基母液的配制方法.doc

培养基母液的配制方法.doc培养基母液的配制方法一、实验目的了解无菌操作掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时,为了使用方便和用量准确,通常采用母液法进行配制,即将所选培养基配方中各试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量,分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存,使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。三、实验器材和药品器材:电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品:NH4N03、KN03、CaC12・2H20、MgS04・7H20、KH2P04、KLH3B03、MnS04祥H20、ZnS04・7H20、Na2Mo04・2H20、CuS04-5H20>CoC12-6H20>FeS04・7H20、Na2-EDTA•2H20、肌醇、烟酸、盐酸毗哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表I培养基浓度含量扩大10倍用夭平称取,用蒸偏水分别溶解,按顺序逐步混合。后用蒸馄水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶,贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时,每配1L培养基取此液100mlo表1MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度(mg/L)扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002kno31900190003CaCl2•2H2044044004MgSOi•7H2037037005KH2PO41701700注意:配制大量元素母液时,某些无机成分如Ca2+、S042—、Mg2+和H2P04-等在一起可能发生化学反应,产生沉淀物。为避免此现象发生,母液配制时要用纯度高的重蒸馄水溶解,药品采用等级较高的分析纯,各种化学药品必须先以少量重蒸馅水使其充分溶解后才能混合,混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、S042一、Mg2十和H2P04一等离子错开混合,速度宜慢,边搅拌边混合。CaC12-2H20要在最后单独加入,在溶解CaC12-2H20时,蒸馅水需加热沸腾,除去水中的C02,以防沉淀。另外,CaC12-2H20放入沸水中易沸腾,操作时要防止其溢出。2、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe)组成。微量元素用量较少,特别是CuS04・5H20、CoC12-6H20,因此在配制中分微量I、II配制。按照表2,表3配方,用电光天平称量,其它同大量元素。配制培养基时,每配制1L培养基,取微量110ml, MS培养基微量I的配制化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1MnSOi••&M0O1•(mg/L)(mg)1CuS04••:使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上,用完以后,用吸耳球将天平内的脏物清理干净。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液,如柠檬酸铁,只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物,必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便,又比较稳定,不易发生沉淀。配制方法同上,直接用蒸馅水加热搅拌溶解,定容至ILo