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广州医学院
硕士学位论文
辛伐他汀对大鼠心肌细胞钠氢交换体作用研究
姓名:孙朴
申请学位级别:硕士
专业:心血管药理
指导教师:罗健东
20100301
广州医学院硕士学位论文辛伐他汀对大鼠心肌细胞钠氢交换体作用研究
辛伐他汀对大鼠心肌细胞钠氢交换体
作用研究

硕士学位申请人:孙朴
导师:罗健东教授
专业:心血管药理

中文摘要
第一部分辛伐他汀对大鼠心肌细胞钠氢交换体作用研究
研究目的:
辛伐他汀( simvastatin, SIM ) 不仅对慢性心血管疾病的防治有明显的效果,还
能够显著减轻缺血再灌注导致的糖尿病小鼠心脏损伤。心肌钠氢交换体( Na+/H+
exchanger, NHE ) 是决定心肌缺血再灌注损伤程度的重要因素。早期的文献资料表明
辛伐他汀能够降低癌细胞内 pH 值,我们最近的研究结果也表明辛伐他汀能够快速
抑制过氧化氢诱导的心肌细胞内 pH 和 Ca2+ 浓度的升高,辛伐他汀预处理能够阻
止过氧化氢诱导的心肌细胞内 pH 和 Ca2+ 浓度的升高,从而抑制过氧化氢诱导的
心肌细胞调亡,具体机制不明确。我们的研究设想是辛伐他汀通过抑制心肌细胞钠
氢交换体而实现其对心肌急性损伤的保护作用,本研究将阐明辛伐他汀新的作用机
制,以确立他汀类药物在心肌缺血再灌注损伤、心肌肥厚和心力衰竭防治策略中的
地位。

研究方法:
选用原代培养的新生 SD 大鼠心肌细胞进行实验。细胞内酸化诱导的:用 25 mM
+
氯化铵(NH4Cl)处理无碳酸氢盐的克氏液孵育的心肌细胞 3 分钟,紧接着用无 Na
的克氏液将 NH4Cl 冲洗干净并孵育 3 分钟,此时细胞内的 NH3 快速扩散到细胞外,
3
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+ + +
促使 NH4 转化为 NH3 而导致细胞内 H 增加,细胞内酸化,然后再用含 Na 的克
氏液替代无 Na+ 的克氏液,此时由于补充了 Na+,细胞内酸化可以激活 NHE 而使细
胞内 pH 得以恢复;应用全波长多功能酶标仪测量系统测定心肌细胞内 pH;钠氢交
换体的活性用酸化后从无钠到有钠阶段每分钟 pH 的变化率(dpHi/dt) 表示;有研究
发现细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase, ERK) 的激活能减少
缺血再灌注损伤诱发的细胞凋亡,用 Western blot 检测心肌细胞 ERK 的磷酸化
(phosphorylated ERK, p-ERK) 水平。

结果:
1. 用 NHE 的抑制剂 5- (N-乙基-N-异丙基) 阿米洛利(5- (N-Ethyl-N-isopropyl)
amiloride, EIPA) 5 µM, 10 µM 作用于无钠和复钠阶段,与酸化模型组相比,可以
使心肌细胞 NHE 的活性受抑制达 %和 % (P>),辛伐他汀不同浓度
组(10 nM, 100 nM, 1000 nM) 抑制 NHE 的作用不明显,与模型组比较,分别使心
肌细胞 NHE 的活性降低-%, %, % (P>), 预孵育辛伐他汀(1000
nM) 10 min, 20 min, 30 min 处理对 NHE 的抑制作用也不明显,与模型组比较,
分别使心肌细胞 NHE 的活性降低 %, %, % (P>)。
2. 用 25 mM 氯化铵诱导细胞内酸化模型,在无钠阶段即开始给药,加入 EIPA (5
µM) 、辛伐他汀(100 nM) 各作用于心肌细胞 3 min,提取心肌细胞总蛋白,检
测 ERK 蛋白磷酸化水平的变化。以总的 ERK 为参照物,与正常对照组比较,无
钠加辛伐他汀组,有钠加辛伐他汀组以及有钠加 EIPA 组分别可以使心肌细胞
ERK 的磷酸化水平升高 %, %, % (p<);与有钠加辛伐他汀组
比较,无钠加辛伐他汀组又高 % (p<)。
3. 用 25 mM 氯化铵诱导细胞内酸化模型,在无钠和复钠阶段均加入 EIPA (5 µM) 各
作用于心肌细胞 3 min,提取心肌细胞总蛋白,并检测酸化模型每一个环节中 ERK
蛋白的磷酸化水平变化。以总的 ERK 为参照物,与正常对照组比较,无钠、有
钠和 EIPA 组分别可以使心肌细胞 ERK 的磷酸化水平升高 %, %,
% (p<0.