荧光原位杂交 FISH操作规程
一、主要试剂
1 变性液 20 SSC 4ml ddH2O 8ml 甲酰胺 28ml
2 PBD 液 1000ml 20 SSC 中加入 20
二、操作流程
1 硅化玻片切片烤片 60 过夜
2 脱蜡入水斜置切片空干
3 2SSC 洗涤三次每次 5min 下简写为 3 5
4 HCl 处理室温 10 接步骤 3
5 蛋白酶 K 处理室温 15 30 接步骤 3
6 切片入 20 梯度酒精脱水各 2 空干
7 切片入 85 变性液 8
8 迅速入 20 梯度酒精脱水各 2 空干
9 杂交液 85 变性 5 0 冰浴 10 滴加至切片加盖玻片
37 过夜
10 反应体系中加入等体积的甲酰胺 45 10
11 2 SSC 洗涤 40 5min 2 SSC 洗涤 37 5min
12 PBD 洗涤切片 3 2
13 滴加异硫氢酸荧光素标记的亲和素 Avidin FITC ,塑膜封
片 37 30min
14 洗涤同步骤 12
15 滴加抗亲和素 Anti Avidin , 37 30min
16) 重复步骤 12 13 12
17 滴加 DAP/I(二脒基二苯基吲哚/碘化丙啶) 直接封片荧光
镜检
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