大创实验初步方案.doc

大创实验初步方案.doc大创实验初步方案乙醛脱氢酶(ALDH)是一类依赖于NAD(P)+的酶类,负责催化生物体内各种醛类转化为对应段酸,该类蛋白质都含谷氨酸、半胱氨酸活性位点,根据蛋白质具体序列差异,生物中至今发现有22个不同家族,其中植物13个,不同家族酶类除了乙醛、丙二醛等通用底物以外,还有各自特异性底物,行使多方面的生物学功能。ALDH7是乙醛脱氢酶家族中一类尤其保守的蛋白质,甚至在动植物之间也有高度的序列同源性,所以又被称为遗蛋白质(Antiquitin)。人类ALDH7基因研究得比较透彻,(AASA)的催化,。植物中ALDH7基因表达受到高盐、干旱等渗透胁迫的诱导,源于ALDH7可以及时清除逆境中产生的有害醛类抵御活性氧(ROS)的产生。拟南芥、水稻中过量表达自身ALDH7可以显著提高植株对逆境的耐性,提高抗氧化能力[7];拟南芥、烟草中过量表达大豆ALDH7,也可提高转基因植株的抗氧化胁迫能力,这些研究进一步反映出该基因巨菌草属于禾本科狼尾草属植物,主要分布在非洲北部地区,1983年由福建农林大学林占嬉研究员引进中国,经过30多年的培育,己经成为一种适合我国南方气候土壤环境的草种。巨菌草适宜在25〜35°C下生长,植株高大,直立丛生,产量高,糖及粗蛋白质含量高,抗逆性较强,既可作培养料栽培食(药)用菌,又可用于制作畜禽饲料,还可以用于水土保持、生物燃料、生物材料等领域的研究。巨菌草作为一种高产优质菌草,有很高的利用价值,值得推广,但其生长需要高温和湿润的土壤条件,而我国南方经常出现的不定期干旱不但降低了它的生产效益,同时也限制了它的进一步推广,因此需要对巨菌草的抗旱性进行一些基础性的研究。巨菌草育种及诱导处理育种本实验采用的是巨菌草种子()。试验于2016年月日至月日在延安大学大学生命科学学院实验室内完成。育种过程为:共准备40个规格一致的圆形塑料盆,每盆盛有2kg土质一样的土,浇足充足的水份。每盆播撒十到十五颗种子,种植深度约三到四厘米,待全部长出芽后,选出芽长势较一致的21盆随机分成3组进行处理。在胁迫处理前每盆每天浇水至土壤保持湿润而土表没有积水。干旱诱导在胁迫处理前每盆每天浇水1L,使土壤保持湿润而土表没有积水。长到2周后,第7组巨菌草停止供水由其蒸腾作用开始进行自然干旱,胁迫天数为6d;ld后,第6组巨菌草停止供水开始自然干旱,胁迫天数为5d;以此类推,直到第2组巨菌草开始干旱胁迫,以此形成一个干旱胁迫梯度。第1组巨菌草每天保持原有浇水量不变作为对照,胁迫天数为Odo每个处理4盆。,剪碎叶片混匀,称取一定质量冷藏于一80°C保存备用。,叶片的含水量和相对含水量测定采用饱和称重法,可溶性蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝G—250染色法,游离氨基酸含量的测定采用前三酮显色法,脯氨酸含量的测定采用磺基水杨酸法。每个指标重复测定3次。