最新新型鸭病毒性肝炎病毒.ppt

新型鸭病毒性肝炎病毒巢式 RT-PCR 检测方法的建立及应用报告人:王梓 (Duck Viral Hepatitis,DVH) 是由鸭病毒性肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV) 引起雏鸭的一种以肝脏为主要病理变化的急性、高度致死性、接触性传染性疾病。鸭病毒性肝炎在临床上以发病急、传播迅速、病程短、高死亡率为主要特征,该病主要侵害 4周龄以内的雏鸭,10 口龄以内的雏鸭的死亡率高达 90%~95% 。 DHV 的历史与分布鸭肝炎病毒(DHV) 包括三个血清型,分别引起Ⅰ型, Ⅱ型和Ⅲ型鸭病毒性肝炎。其中Ⅰ型鸭病毒性肝炎呈世界性分布。我国流行的鸭病毒性肝炎主要为Ⅰ型鸭病毒性肝炎,近年来陆续有新型鸭病毒性肝炎发现三个型之间无抗原相关性,没有交叉保护和交叉中和作用。 DHV 最早发现是在1945 年由 Levine 在美国发现了Ⅰ型鸭病毒性肝炎。该病呈世界性分布,曾在加拿大、意大利、法国、日本、美国和埃及等地流行、在我国广东、北京、浙江、福建、四川、安徽、广西、江苏、山东等地相继发生该病、目前几乎世界范围内主要养鸭地区均存在该病,给养鸭业带来了巨大的经济损失。Ⅱ型鸭病毒性肝炎是 1958 年首先爆发于英格兰诺福克鸭场,其他地区未见本病的报道。Ⅲ型鸭病毒性肝炎是 1969 年首次发现于美国纽约长岛地区。 1999 年,苏敬良等和黄安国等在北京和广西等地在 3~13日龄疑似鸭肝炎的北京鸭和樱桃谷鸭上分离到两株与 I型和 III型 DHV 无血清学交叉免疫反应的 DHV ,认为出现了新的血清型,并将其命名为新型鸭肝炎病毒。新型鸭病毒性肝炎的基因组与 I型结构相似, 但比 I型 DHV 基因组稍大。同时,发现高变区主要存在于 VP1 和 VP3 基因、在 VP1,VP3 基因上存在多个 T细胞抗原表位和 B 细胞抗原表位, VP1 基因的变异致使不同血清型 DHV 抗原性发生改变。 DHV 的生物学特征 2006 年 Kim M C 报道了 I型 DHV 的全基因组序列, 2007 年 Tseng C H 报道了 DHV-1 型变异株全基因组序列,为 DHV 的研究做出了新的突破。 DHV 与其他小 RNA 病毒相比, DHV 基因组具有一些特殊的结构特征,TsengC H 等建议将 I型 DHV 归为小 RNA 病毒科一个新的独立的属。 等构建出了具有感染性的 DHV 全长 cDNA 克隆,为进一步揭示 DHV 基因组的结构和功能及防控该病提供了良好的技术平台。 I型 DHV 基因组大小约为 7,690nt, 编码 2,249aa 、具有一个较大的开放阅读框(ORF) ,在基因组 RNA 两端各有一段保守的非编码区,I型 DHV 全基因组结构依次为:5'UTR(626nt)-VPO-VP3-VPl-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C- 3D-3'UTR (314nt),5'UTR 内含有病毒翻译起始所必需的内部核糖体进入位点(IRES) I型 DHV 的 IRES 己报道具有 8个茎环结构, 3’ UTR 内含有病毒 RNA 复制和翻译有关的 poly(A) 尾。 I型 DHV 的3’ UTR 为314 nt ,新型 DHV 的 3’ UTR 为366 nt ,均具有典型的小 RNA 病毒的基因组结构、,I型 DHV 多聚蛋白具有 11个切割位点, 且具有与小 RNA 病毒相似的切割位点和保守基因序列。基因组编码区包含结构蛋白和非结构蛋白,分为 3种初级前体分子 P1,P2,P3, 其中, P1 前体蛋白裂解为组成病毒衣壳蛋白 VP0,VP3 和 VP1 ,3种结构蛋白。 P2 和 P3 构成病毒的非结构蛋白。 P2 编码 2A1,2A2,2A3,2B 和 2C 3 种非结构蛋白, P3 编码 3A,3B,3C 和 3D 4 种非结构蛋白。 非编码区 I型 DHV 基因组 5‘ UTR 长 626 nt , 内含病毒翻译起始所必需的内部核糖体进入位点(IRES) 。在各病毒属不同血清型之间,小 RNA 病毒 IRES 元件的序列和二级结构具有保守性,是病毒存活所必需的。小 RNA 病毒的 IRES 分为 3个型, I型 IRES 的病毒包括肠道病毒属和鼻病毒属,心脏病毒属、口疮病毒属,双埃柯病毒属的 IRES 属于 II型 IRES; 甲肝病毒属的 IRES 属于 III型 IRES 。通过对 I型 DHV 的 RNA 级结构预测表明, I型 DHV 的5’ UTR 可能含有 II型 IRES 的颈环结构而没有 I型的三叶草结构, 据此推断 I型 DHV 的5’ UTR 区域会形成 II型的 IRES I型 DHV 的3’ UTR