核酸的制备与鉴定项目报告.doc

核酸的制备与鉴定项目报告.doc核酸的制备与鉴定项目报告项目名称:核酸的制备与鉴定班级:10食品组员:柴鲜鲜,王锦,安艳松,蒋玉丹项冃实验吋间: 背景知识1概念核酸是由核昔酸聚合而成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。最早由米歇尔于1868年在脓细胞中发现和分离出来。广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内。生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。核酸由碳、氢、氧、氮、磷5种元素组成。基本组成成分是磷酸、戊糖和碱基。2种类按组成成分戊糖不同分为脱氧核糖核酸(眄和核糖核酸TO两大类。ENX是生物体主要的遗传物质,通过复制将遗传信息由亲代传给子代。艮4参与蛋白质的合成,与遗传信息在子代的表达有关。细胞中的恥有三类:信使核糖体恥(砂,转移(two3生物合成遗传信息的传递和表达主要通过复制、转录和翻译进行。复制(replication)是指以原来ENA分子为模板,合成出相同Z分子的过程;转录(transcriptio®是以D3分子为模板合成出与其核昔酸顺序相对应的磋抽勺过程;翻译(translation)是在由蛋白质组成的核糖核蛋白体(简称核糖体)上,以为模板,根据每3个相邻核昔酸决定一种氨基酸的三联体密码规则,由tRNA运送活化的氨基酸,EP提供所需能量,合成出具有特定氨基酸顺序的蛋白质肽链的过程。4应用现已发现近2000种遗传性疾病都和rw吉构有关。如人类镰刀形血红细胞贫血症是由于患者的血红蛋白分子中一个氨基酸的遗传密码发生了改变,白化病患者则是D3分子上缺乏产生促黑色素生成的酷氨酸酶的基因所致。肿瘤的发生、病毒的感染、射线对机体的作用等都与核酸有关。70年代以来兴起的遗传工程,使人们可用人工方法改组D4从而有可能创造岀新型的生物品种。如应用遗传工程方法已能使大肠杆菌长牛胰岛索,干扰索等珍贵的牛化药物。二:项目实施1、实验目的熟练掌握核酸的性质及应用。掌握核酸分离提纯以及含量测定的方法。2核酸的提取方法方法一:稀碱法利用细胞壁在稀碱条件下溶解,使释放出来,这种方法提取时间短,但在稀碱条件下不稳定,容易被碱分解。方法二:浓盐法利用RNA和口3在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的IW占液口含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而口呕位于上层水相中,用2倍体积95%,再按氯仿^:阴离子去污剂法:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,%与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取ENA方法四:.苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,ase的降解作用•用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与口3联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而EN搭于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含Z的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀恥。此时E是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。方法五:水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去眄然后将沉淀溶于水中,使Z充分溶解于水中,离心后收集上清液•在上清中加入固体氯化钠调节至2何加入2倍休积95%乙醇,立即用搅拌法搅出•然后分别用66%;80%和95%乙醇以及丙铜洗涤。(X1),20mL(X1),lmL(X切;量筒10mL(X1),50mL(X1);滴管;水浴锅;离心机。;95处醇;;浓氨水;®肖酸银。酸性乙醇溶液::将2mL10%三氯化铁(FeC136H2Q溶液加入40CHL浓HZlo苔黑酚(3,1症基甲苯)乙醇溶液:称取6g苔黑酚溶于95%乙醇lOOmL定磷试剂:1骯硫酸:将ITmL浓硫酸(比重108切缓缓倾入83mL水屮;%鉗酸鞍:;1玖抗坏血酸溶液:10g抗坏血酸溶于lOOmL水,棕色并保存溶液;临用时将三种溶液和水按下列比例混合:硫酸:25%鉗酸镀:1吆抗坏血酸:水=上上上2(0o干酵母粉4提取具体步骤(。⑵悬浮液转入三角烧瓶,沸水浴加热3001%冷却,转入离心管。3000转力>。离心15分钟后,将上清慢慢倾入lCtnL酸性乙醇,边加边搅动。(切加毕,静置,待眄冗淀完全后,3000加in离心3mia弃去上清液。(5)用95%乙醇洗涤沉淀两次。再用乙醛洗涤沉淀一次后,用乙醍将沉淀转移至布氏漏斗抽滤,