植物水杨酸（SA）酶联免疫分析.docx

植物水杨酸（SA）酶联免疫分析.docx植物水杨酸(SA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用干测定植物组级,细胞上清及相关液体样本中水杨酸(SA)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物水杨酸(SA)水平。用纯化的植物水杨酸(SA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入水杨酸(SA),再与HRP标记的水杨酸(SA)抗体结合,形成抗体■抗原■酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的水杨酸(SA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值),通过标准曲线计算样品中植物水杨酸(SA)浓度。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8°C保存标准品:1350pmol/-8°-8°C保存酶标试剂3mix1瓶6mlXl瓶2-8°C保存样品稀释液3mlX1瓶6mlXl瓶2-8°C保存显色剂A液3mix1瓶6mlXl瓶2-8°C保存显色剂B液3mlX1瓶6mlX1瓶2-8°C保存终止液3mlXl瓶6mlX1瓶2-8°C保存浓缩洗涤液(20mlX20倍)XI瓶(20mlX30倍)XI瓶2-8°C保存样本处理及要求:血清:室温血液自然凝固10・20分钟,离心20分钟左右(2000・3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10・20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000・3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(-)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入一定量的PBS(),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于・20°C保存,“N3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤:标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100卩1,然后在第一、笫二孔中加标准品稀释液50卩1,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100Ml分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50卩1,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50卩1弃掉