免疫胶体金技术课件.ppt

胶体金免疫技术echnique许贇兴2018年3月胶体金标记技术的相关定义胶体金免疫技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体反应的一种新型的免疫标记技术。胶体金是指金盐在还原剂作用下还原成金原子,聚合成一定大小(呈色不同)的金颗粒,形成带负电的疏水胶溶液。免疫金实质上是胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物。胶体金颗粒带电情况      抗体和金颗粒的耦联(图出处:IVDTechnology)Synthesisandpropertiesofdifferentparticlesize胶体金粒径(nm)1%柠檬酸三钠加入量(ml),取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。胶体金技术的种类及优点快速免疫金渗滤法(immuogoldfiltrationassay,IGFA)——斑点金免疫渗滤试验即穿流式(flowthrough)的固相膜免疫测定。主要由两部分组成:膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒,其中填满吸水性物质,面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜,标记结合物为免疫金。A:金标记抗体B:标本中的抗原C:包被抗体D:NC膜E:吸水材料F:塑料盒顺序:标本——免疫金——洗涤液阳性:红色斑点间接法:包被抗原,少用免疫层析法(immunochromatogra-phy,ICA)是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定,与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同,免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流(lateralflow))向另一端移动。移动过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化,无关物质则越过该区域而被分离,然后通过标记物显色来判定试验结果,以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。双抗体夹心法、竞争法、间接法胶体金免疫层析法试剂的组成样品垫(Samplepad):玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质,多种规格,批间稳定。样品垫的作用:减缓样品渗透速度,有利于样品在结合垫上均匀分布;去除样品中杂质颗粒;调节样品液pH值或粘度等。