PCR(聚合酶链式反应)实验报告课件.pptx

~(聚合酶链式反应):在物质中提取的DNA量较少,之后大量扩增,:热变性温度:95度(计算方法:每对AT为2度,CG为4度)过程:DNA双链断裂形成单链复性温度:55度过程:引物配对上DNA单链延伸温度:72度过程:DNA酶催化DNA互补链的延伸循环(大约循环20~30次)、引物、dNTP、Mix缓冲液(DNA聚合酶、镁离子)、:5’~3’,、制胶用量:。若目的DNA片段量过小可增加琼脂糖凝胶的浓度;相反,若DNA片段过大,可降低琼脂糖凝胶的浓度方法:配胶用单蒸水溶解,在微波炉中加热,放置微烫手,再加入核酸染液约20微升,可倒入胶板中等待凝固加样在一次性手套上将LoadingBuffer与样液混匀(6×LoadingBuffer为LoadingBuffer:样液=1:5)保种保种液:25%甘油:将菌液低转速(5000rpm)大约离心2600ml的菌液(2管离心管)50%甘油:将菌液和保重液同体积混合保种贮藏加入600~700微升的保种液,放置在-80度中(保种管、离心管)保存生物膜的抑膜与解膜抑膜与解膜的定义:抑膜是在细菌生长的同时加入化合物是细菌不成膜;解膜是利用化合物降解已存在的细胞膜。对致病菌的认识:枯草芽孢杆菌:阳性菌,形成的细胞膜在液体与气体表面,褶皱铜绿假单胞菌:阴性菌,形成的细胞膜在液体底部金黄色葡萄球菌:阳性菌,形成的细胞膜在液体底部对成膜条件的尝试将涂平板的细菌接入液体培养基(LB)中,摇床24小时左右在酶标仪中测量LB中的细菌数,将细菌稀释到5×10^5,放入24孔板中培养,总体积约1~:对照:Msgg培养基+菌液阴性对照:Msgg培养基+菌液+DMSO实验组:Msgg培养基+菌液+不同浓度梯度的化合物实验结果初步了解EKA对枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,且浓度越高抑制作用越强