分析化学实验：荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量课件.ppt

实验二十八荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量 S 2S 1S 0 T 1 吸收发射荧光发射磷光系间跨越 3 内转换振动弛豫能量?? 2 ?? 1?? 3 外转换??? 2 T 2内转换振动弛豫一、实验目的 F- 4500 荧光分光光度计二、方法原理利用荧光分析方法,测定能产生荧光的物质含量,对不能产生荧光的物质,可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂,与非荧光物质形成较纯的荧光化合物,然后进行测定,是一种高灵敏度的分析方法。定性依据: 激发光光谱荧光光谱定量依据: 当? l c ≦ 时,将括号项近似处理后: F = ?I 0 ? l c = Kc 定量方法标准曲线法: 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度, 绘制标准曲线,再在相同条件下测量未知试样的荧光强度,在标准曲线上求出浓度. 比较法: 在线性范围内,测定标样和试样的荧光强度, 比较. 荧光仪器组成: 激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点:有两个单色器,光源与检测器通常成直角。三、实验内容(一)硫酸奎宁激发光谱的绘制用 mol /L硫酸溶液为参比溶液,用 10 mg/L 的硫酸奎宁溶液作为测定液。固定荧光波长为 443 nm ,从 300 nm 到 400 nm , 每间隔 10 nm 测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出激发光谱图,指出最大激发波长λ max 为 345 nm 。?(二)硫酸奎宁荧光光谱的绘制?用 10 mg/L 的硫酸奎宁溶液作为测定液。?从 380 nm 到 600 nm ,每隔 20 nm 测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出荧光光谱图,指出最大发射波长λ max 为 445 nm 。