骨髓间充质干细胞移植在脑复苏治疗中应用的实验研究.pdf

中山大学
博士学位论文
骨髓间充质干细胞移植在脑复苏治疗中应用的实验研究
姓名:符岳
申请学位级别:博士
专业:急诊医学
指导教师:黄子通
20070508
骨髓间充质干细胞移植在脑复苏治疗中应用的实验研究中文摘要,贾录ǜ叩闹滤馈⒅虏新剩殉晌M踩死嘟幕颊呷此婧笠蚰怨δ芩鸷Χ劳龌虿辛羯窬低澈笠胖ⅰH绾斡行У厥凳损害,因而有待新的治疗措施出现以提高脑复苏的治疗效率。干细胞移植是近几年兴起的治疗手段,在此前脑梗塞的实验研究中,以骨髓间的进展,研究表明移植后减轻了局灶性缺血导致的神经元损伤,减少了梗死面积,并促进了神经功能恢复,提示移植可能在脑复苏治疗中具有一定的应用前景。目前尚未有干细胞移植应用于脑复苏治疗的研究报道,而全脑缺血损害发病机制、缺血损伤范围、性质都有别于局灶性脑梗死,因此移植后如何在脑组织内分布和分化,是否能减轻全脑缺血损伤尚不得而知。本研究探讨移植对心搏骤停后全脑缺血损伤的治疗作用以探索新的脑复专业:急诊医学博士生:符岳导师:黄子通教授心搏骤停康的重要因素。近年来随着急救网络完善,急救技术进步,心搏骤停患者恢复自主循环的机会增加,但绝大多数自主循环恢复脑复苏治疗挽救缺血神经元,促进受损神经组织修复以尽可能维持正常的神经功能已成为心肺复苏的重点,也是目粄『急救医学面临的难题。长期以来,脑复苏药物治疗的研究进展不大,低温治疗虽具有一定的脑保护作用,但难以逆转已形成的神经充质干细胞V鞯母上赴瘟迫〉昧肆钊酥跄苏治疗途径。主要内容包括:建立大鼠培养和扩增方法,体外验证向神经元样细胞分化的能力;建立大鼠脑复苏模型;增强型绿色荧光蛋白珽标记,
第一部分大鼠骨髓问充质干细胞体外培养及向神经元样细胞分化的研究研究目的材料和方法结果的治疗作用以及移植细胞在脑内分布和分化情况;进一步利用磁共振成像建立大鼠骨髓的体外培养方法,研究的生物学特性。—大鼠,无菌条件下抽取骨髓,用贴壁培养法分离骨髓,在。%⒈ズ褪6鹊奶跫拢院生物学特性培养过程中观察细胞形态,以ú舛ㄏ赴で撸流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原、以丹参和匣掖甅进行诱导,选择生长状态良好的第腗,膍偷鞍妆泶锴榭觥细胞培养原代培养后灰菏笨杉倭肯赴谏ぃ碧谙赴此时可进行第一次传代。此后细胞增长迅速,炜纱ù次。代时细胞形态较琈际趸钐迨咀僖浦驳腗在体外向神经元样细胞分化的能力。为移植在脑复苏治疗中应用的研究提供实验和理论基础。胎牛血清的/嘌嘌半量换液,全量换液。天细胞铺满瓶底后第一次传代,此后在细胞生长至约%融合时进行传代。、、表达情况。诱导向神经元样细胞分化/孑芏冉又孔板,加入丹参和预诱导液培育慌嘌海琍洗涤危直鸺尤氲げ魏诱导液诱导。观察诱导后细胞形态变化,采用和免疫荧光技术检测星形胶质细胞酸性蛋白珿和微管相关蛋白一增多,可见细胞克隆,笥铱杉洗笙赴寺⌒纬桑赴喑仕笮危鑫醒帕校为一致,成均一的梭形。代以后细胞增长速度减慢,出现老化现象。原代接种一骨髓间充质干细胞移植在脑复苏治疗中应用的实验研究....
结论第二部分大鼠心搏骤停和复苏装置研发和脑复苏模型的建立研究目的材料和方法只大鼠的骨髓细胞经天左右可培养至代,细胞数可达到×生物学特性生长性状较为稳定,、、细胞生长曲线基本一致,细胞群体倍增时间为.。表达诱导向神经元样细胞分化在加入两组诱导液后形态均发生明显改变,大多数细胞伸出突起嵬,在突起处可再伸出多极的分支,呈现典型双⒘薓嘌吞逋饫┰龅氖笛榉椒ǎ甅〔姆奖悖鲋郴钚愿撸逋馀嘌子诶┰觥⒋炕细上赴浦惭芯研发大鼠心搏骤停和复苏装置ǖ绱碳ぶ虏骱突蹈此兆爸,掌握利用该装置建立标准复苏模型的技术参数和实验条件;研究建立脑复苏模型的合适缺心搏骤停和复苏装置研发和复苏模型研究研发用于大鼠交流电致颤器和机械复苏装置。选用雄性大鼠只,应用研发的心搏骤停和复苏机械装置,持续交、,不表达、,在代,表达、阳性率可达罸%以上,细胞达到较好纯化。极和多极的神经元细胞形态,诱导后绝大多数细胞形态变为神经元样,相互之间连接呈网状。免疫荧光和—。的需要;。血时间;探讨检测在评价全脑缺血损伤中的应用价值。流电经右心室内膜致颤。在氖也螅J几幕敌赝獍囱购屯步机械通气,随后双向波经胸体外除颤。骨髓间充质干细胞移植在脑复苏治疗中应用的实验研究.
结果脑复苏模型合适缺血时间的研究实验分组:哉兆椋惺质醪僮鳎致颤和复苏;组,无处理室颤,复苏椋薮硎后、、、直鸾心宰橹±硪约昂考觳夂蚇神经功能评分。对照组在手术完成后猩鲜黾觳夂推婪帧评价全脑缺血损伤的研究行检测。对照组淮笫笤谕瓿墒质醪僮骱蠱觳狻觳庑蛄邪心搏骤停和复苏装置研发了大鼠致颤器,输出电流鹘诜