《仪器分析》《《仪器分析仪器分析》》第二章南京工业大学高效液相色谱法高效液相色谱法以液体作为流动相的色谱过程概述-定义高效液相色谱概述-特点高压------150 ~ 350 x 10 5 Pa 高速---小于 1h 高效---3 万塔板/米(气相色谱 2000 塔板/米) 高灵敏度---10 -9~ 10 -11 g 特点特点特点概述-特点气相色谱?惰性气体(无亲和性,只起运载作用) ?气体、沸点较低的化合物?分析温度较高 GC 和 HPLC 比较液相色谱?不同极性的液体(有一定亲和作用) ?高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物?一般室温?在所有色谱技术中,液相色谱法是最早( 1903 年)发明的,但其初期发展比较慢,在液相色谱普及之前,纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。?到了 20 世纪 60 年代后期,将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来,使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进,使液相色谱分析实现了高效化和高速化。?具有这些优良性能的液相色谱仪于 1969 年商品化。从此,这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法( high performance liquid chromatography , HPLC ),也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。?气相色谱适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物; ?而 HPLC 则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质,如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。?现在, HPLC 的应用范围已经远远超过气相色谱,位居色谱法之首。分析对象?通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。?按分离机理,有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处,或是在分离过程上有所不同,通常被赋予了比较固定的名称。高效液相色谱的类型高效液相色谱的类型 HPLC 按分离机理的分类蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析生化特异亲和力亲和色谱手性异构体分离,药物纯化立体效应手性色谱蛋白质分离与纯化疏水分配作用疏水作用色谱离子性物质分析疏水分配作用离子对色谱有机酸、氨基酸、醇、醛分析 Donnan 膜平衡离子排斥色谱无机离子、有机离子分析库仑力离子交换色谱高分子分离,分子量及其分布的测定溶质分子大小凝胶色谱各种有机化合物的分离、分析与制备疏水分配作用分配色谱异构体分离、族分离,制备吸附能,氢键吸附色谱主要分析对象或应用领域主要分离机理类型液相色谱仪单元组件基本组件高压输液泵色谱柱检测器数据系统记录仪积分仪色谱工作站其余组件在线脱气装置梯度洗脱装置自动进样系统全自动控制系统柱后反应系统液相色谱仪的工作流程输液泵将流动相以稳定的流速(或压力)输送至分析体系 1 进样器将样品导入色谱柱前,流动相将样品带入色谱柱 2 各组分在色谱柱中分配系数或吸附力大小的不同而被分离 3 各组分依次随流动相流至检测器,产生检测信号 4 数据系统记录、处理或保存信号。 5
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