还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定.doc

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定关键词: 还原型谷胱甘肽 GSH 氧化型谷胱甘肽 GSSG 测定2009-04-2400:00 来源:互联网 点击次数:6147GSH和GSSG参照Anderson等(1992)。,加入3mL冰冷的6%的偏磷酸(含1mmol•L-1 EDTA,),冰浴研磨,匀浆液以20,000g,4℃离心15min,取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20℃下等待测定。总的GSH和GSSG含量测定如下:(110mmol•L-1 Na2HPO4•7H20,40mmol•L-1NaH2PO4•H2O,15mmol•L-1EDTA,•L-1 5,5‘-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid)DTNB,%BSA)、320μL反应液2(1mmol•L-1 EDTA,50mmol•L-1 %BSA)、400μL反应液3(5%Na2HPO4,)、•L-1 NADPH。测定OD412下的吸收值。GSSG含量测定如下:200μL提取液加入1mL的2-2乙烯嘧啶(稀释50倍)在25°C下水浴1h再测定OD412下的吸收值。GSH的含量可以从总的GSH和GSSG含量中减去GSSG含量获得。GSH测定方法:,加入预冷的5%,充分冰预研磨,转入离心管中,于4℃下20,000×g离心20min,将上清液分装,液氮冷冻后于-20℃保存或直接进行抗氧化剂分析。取50μL上清液,用5%磺基水杨酸定容至100μL(即加入5%磺基水杨酸50μL),•L-1三乙醇胺triethlenediamine以中和样液,加入50μL10%乙烯吡啶Polyvinylpyridine(用70%乙醇配制),25℃水浴1h,以除去GSH,到时加入706mL50mmol•L-1磷酸缓冲液,,•L-1 EDTA,加入20μL10