重组腺病毒载体携带反义微小RNA-21对膀胱癌细胞生长的作用.pdf

中国实验诊断学年月第卷第期一一
文章编号:———
重组腺病毒载体携带反义微小.
对膀胱癌细胞生长的作用
朱德淳,李然伟,刘禄成,温都苏,魏巍
吉林大学第二医院泌尿外科,吉林长春
摘要:目的探讨重组腺病毒载体介导的微小反义寡核苷酸对人膀胱癌细胞株
生长的影响。方法构建反向插入一基因的重组腺病毒载体一,并用反义一转染
,即病毒载体用药组。采用噻唑蓝法和原位末端标记法检测细胞的增殖和凋亡情况。同时设
对照组和空病毒组作为对比。结果用药组、对照组和空病毒组细胞的增殖率分别为.±
.%、.±.%、.±.% ;凋亡率分别是.±.%、.±.%、.±.%。用药组的增殖率
和凋亡率分别与对照组和空病毒组相比较,差异均有统计学意义.,而对照组与空病毒组之间差异无统计学
意义.。,增加细胞凋亡,进而抑
制膀胱癌细胞生长。
关键词:膀胱肿瘤;微小.;重组腺病毒;基因治疗
中图分类号:. 文献标识码:
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膀胱癌细胞能过度表达癌基因微小一—系统购自本元正阳公司。限制性内切酶等
一,其表达与膀胱癌的发生发展密切相各种工具酶购自公司。反义和随机对照寡
关,,。本研究核苷酸购自上海吉玛制药技术有限公司。反义
—一为
体..,,随机对照序列为—
,对人膀胱癌细胞。在中行证实
株增殖和凋亡的影响,从而为膀胱癌的基因治与任何已知哺乳动物基因无匹配。反义
疗寻找更为有效的新方法并提供实验依据。
材料与方法方法参考文献。
. 细胞及主要试剂人膀胱癌细胞株购自. 方法①
中国科学院上海细胞所。腺病毒表达载体一染率:取对数生长期的细胞接种于孔培养
板,每组复孔,每孔细胞数为×个,℃培养
基金项目:国家自然科学基金资助课题
一—,,,,.
后更换培养液,继续培养后每孔分别加人
含—的培养液,孵育,轻轻吸去上清
后分别用荧光显微镜和流式细胞仪观察并测定荧光
蛋白表达情况。②评价反义.
对细胞增殖的影响:取对数生长期的细胞,
分别加入—一和—,后提取细
胞基因组,,凝胶
电泳正确后测序,测序正确后取对数生长期的
细胞,相差显微镜观察感染细胞变化,
镜观察细胞状态,最后用比色法检测细胞
增殖率。③. 细胞增殖率比色法分别检测反义
凋亡率:按照反义一组病毒载体用药—.组、—组和空白对照组细
组,.组空病毒组和空白对照组分为胞增殖率。组结果见表。—一组和另
组。每组取对数生长期的细胞分别接种于外两组问分别比较,差异有统计学意义.,
孔培养板,每组复孔,每孔细胞数为×个, ,差异无统计学意义尸
%培养后轻轻吸去上清。每组分别加进.。上述统计结果表明反义—一具有
—.、—和生理盐水。继续培