高效液相色谱分析.ppt

指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上,采用了高压泵、高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。第三章高效液相色谱分析法HPLC(HighPertormanceLiquidChromatography,)§3-1高效液相色谱法的特点一、:适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品,占有机物的20%HPLC:适于溶解后能制成溶液的样品,对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测,占有机物的80%:流动相为惰性,气体组分与流动相无亲合作用力,只与固定相有相互作用。HPLC:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起正向作用。:加温操作HPLC:室温;高压(液体粘度大)(滤棒,可滤去颗粒状物质)(输液泵)————、高效液相色谱仪流程图高效液相色谱法HPLCHighPerformanceLiquidChromatography正相色谱反相色谱Reverse-phaseChromatography三、HPLC的特点和实际应用1、利用其高柱效,有效分离极复杂体系中的痕量组分。2、用离子型固定相建立的离子交换色谱分析离子型体的含量。蛋白质、氨基酸、常见阴阳离子等3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分离高分子化合物。一、液固吸附色谱法(LSC)(liquid-solidadsorptionchromatography)二、液液分配色谱法(LLC)(liquid-liquidpartitionchromatography,chemicalbondedphasechromatography三、离子色谱法(IC)(ion-exchangechromatographyandionpairchromatography)四、空间排阻色谱法(SEC)(stericexclusionchromatography)§3-::载体+固定液(物理或机械涂渍法)——固定液极性>流动相极性(NLLC)极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱适于分离极性组分反相色谱——固定液极性<流动相极性(RLLC)极性大的组分先出柱,极性小的组分后出柱适于分离非极性组分液液分配色谱法(LLC))等度洗脱:以固定配比的溶剂系统洗脱组分2)梯度洗脱:在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例即不断改变其极性(两个泵)适于分析极性差别较大的复杂组分§3-:恒流泵:)隔膜进样(高分子有机硅胶垫→进样室)2)阀进样:不必停泵,六通阀