实验一 病毒的红细胞凝集试验.ppt

实验一病毒的红细胞凝集试验CHA)实验目的掌握病毒的血凝试验操作方法÷2、掌握病毒凝集价(抗原效价)的判断。二、实验原理令某些病毒表面含有血凝素,能与鸡红细胞表面的粘蛋白受体结合,使红细胞发生凝集称为病毒的红细胞凝集现象,简称为血凝现象三、在生产中的应用、辅助诊断病毒性疾病。能凝集红细胞的病毒有新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒2、测定病毒的凝集价(抗原效价)。3、配制4单位病毒抗原为凝集抑制试验做准备四、实验材料96孔Ⅴ型微量反应板、振荡器1台(振荡96孔∨型板)、被检病毒液、1%的鸡红细胞悬液、生理盐水、微量移液器等1%红细胞悬液制备令1、抗凝血的制备采集3只非免疫成年健康鸡血液,由翅静脉或心脏采血,%柠檬酸钠与血液1:4混合制成2、1%红细胞悬液制备将抗凝血加入离心管内,用生理盐水洗涤5次,每次20m离心5mm,将血浆、白细胞充分弃去,最后一次离心时间为10min,离心结束后,弃去上清液,根据剩下的红细胞体积,用生理盐水配制成1%红细胞悬液五、实验方法与步骤加稀释液用微量移液器向反应板的第1~12孔各加生理盐水50微升。令2、倍比稀释被检病毒液用微量移液器吸取待测病毒液50微升于第一孔中,并反复吹打4~5次,混匀后吸出50微升至第2孔,依次倍比稀释到第11孔,弃去50微升;12孔不加抗原作对照。孔号123456789101112病毒212223242526272829210211对稀释照倍数3、加1%的鸡红细胞悬液用微量移液器向1~12孔各加1%红细胞悬液50微升4、置于微量振荡器上,振荡1分钟。÷5、室温静置15~20分钟后观察结果。6、结果观察:方法1:从平面观察,红细胞为一小圆点沉于孔底者,表明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔底的红细胞铺平孔底,凝成均匀薄层,说明红细胞被病毒所凝集。如下图方法2将反应板倾斜4度角,沉于孔底的红细胞不完全被病毒凝集;如果孔底的红细胞铺平孔底,凝成均匀薄层,倾斜后红细胞不流动,说明红细胞被病毒所凝集。如下图235678910n2