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PDA培养基配制方法
一、目标要求
1．学习并掌握配制培养基通常方法和步骤。
2．学习并掌握棉塞制作方法。
二、培养基配制原理
培养基是人工配制多种营养物质供微生物生长繁殖基质，用以培养、分离、判定、
保留多种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训
和研究目标不一样，所以培养基种类很多，但不管是何种培养基，均应含有水分、碳源、
氮源、能源、无机盐等。不一样微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应依据不
同微生物对pH值要求，将培养基调到适宜pH值范围。
三、实训材料和用具
琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖， 10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，
四、操作方法和步骤
(一) 培养基配制
PDA培养基配制 其配方以下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮 药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不停搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装 按实训要求，将配制培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超出其容积二分之一为宜；半固体培养基以试管高度1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4) 加棉塞 培养基分装完成后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并确保有良好通气性能。
(5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以预防灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(二) 棉塞制作
棉塞作用有二：一是预防杂菌污染；二是可过滤空气，确保通气良好，并可减缓培养基水分蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中关键一环。正确棉塞是形状、大小，松紧应和试管口(或三角烧瓶)完全适合。过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到灭菌目标。棉塞过小往往易掉进试管内，所以棉塞质量优劣对实训结果有很大影响。正确棉塞头较大，加塞时，应使棉塞长度1／3留在试管口外，2／3在试管口内（见实训图6-4）。现在，有条件实训室已使用坚固塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替换棉塞，制作棉塞要选纤维较长棉花，通常不选择脱脂棉。因为它轻易吸水变湿，造成污染，而且价格也贵。棉塞制作方法见图6-5
实图6-4棉塞