细胞传代实验报告样稿.doc

细胞传代培养

初步掌握哺乳动物细胞原代培养和传代培养基础操作过程，为生物技术在医学上
应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生
长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术最大优点是使我们得以直接观察
活细胞，并在有控制环境条件下进行试验，避免了体内试验时很多复杂原因，还能够和
体内试验互为补充，可同时提供大量生物性状相同细胞作为研究对象，花费少，比较经济，
所以成为生物学研究关键手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取组织细胞进行首次培养为
原代培养；当原代培养细胞增殖达成一定密度后，则需要做再培养，立即培养细胞分散
后，从一个容器以1：2或其它比率转移到另一个或多个容器中扩大培养，为传代培养，传
代培养累积次数就是细胞代数。
细胞培养是一个程序复杂、要求条件多而严格试验性工作。全部离体细胞生长全部受
温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等全部有严格规范和要求，尤其是无菌操
作是细胞培养成败关键。
三、材料和试剂
1、细胞：293细胞株
2、试剂：％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精
灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞培养板中原来培养液吸去。
2、加入1~2ml ％胰酶溶液，使板底细胞全部浸入溶液中。
3、立即吸走胰酶液 ，再次加入2ml左右胰酶，一样立即吸去，再加入几滴胰酶放入 培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁细胞反复吹打成悬液，再根据 观察生长情况确定传代百分比传代
（剩下细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右培养液
，将培养板放入培养箱

附：消化液配制方法：
，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4℃保留，
用前可在37℃下回温。
10x pbs配方：na2hpo4() kh2po4() nacl(80g) kcl()
(调 至ph=）
五、试验结果
传代后细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，
达成七八成满。这时需再次传代
六、讨论和反思
无菌操作中注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。操作前20～30分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口全部要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后操作全部全部要在超净台内完成。操作完成后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用吸管在从消毒铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸收液体。总而言之，在整个无菌操作过程中全部应该在酒精灯周围进行。
天天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康标准：健康细胞形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧篇二：细胞生物学试验 传代培养
一、【试验目标】
1、了解动物细胞传代培养基础原理。
2、掌握动物细胞传代培养基础操作，并对hela细胞进行传代培养。
二、【试验原理】
hela 是henrietta lacks简称，henrietta lacks 是一位患有子宫颈癌美国妇女名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
培养细胞特征：
贴附生长：必需贴附于支持物表面才能生长。见于多种实体瘤细胞。
悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。见于多种造血系统肿瘤细胞。
每代贴附生长细胞生长过程：
1、游离期 细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟一4小时
2、贴壁期 细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
3、血清中有促进细胞贴壁冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷糖蛋白促贴壁因子先吸附于底物上，
悬浮细胞再和吸附有促贴
壁因子附着。
4、潜伏期 此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期通常为6～二十四小时。
5、对数生长久 细胞数随时间改变成倍增加，活力最好，最适合进行试验研究。
6、停止期（平台期） 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂
细胞传代方法
1、悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2