细胞凝集反应实验报告样稿.doc

【试验题目】
细胞凝集反应
【试验目标】
1、了解细胞表面结构。 
掌握细胞凝集原理。 
掌握细胞凝集试验操作方法。
【试验材料和用具】
1. 试剂：PBS缓冲溶液、%氯化钠溶液（生理盐水）
2. 器具：酒精棉球、双凹片、载玻片、一般光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管
3. 材料：兔子静脉血
【试验原理】
凝集素
凝集素（lectin）是一类含糖（少数例外）并能和糖专一结合蛋白质，它含有凝集细胞和刺激细胞分裂作用。现在已发觉近千种植物中含有凝集素，在多种真菌、无脊椎动物、脊椎动物、人体多种组织和器官中及一些病毒体内也含有凝集素。常见为植物凝集素，通常以其被提取植物命名，凝集素为它们总称。
在细胞表面，组成细胞膜糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。凝集素使细胞凝集是因为它和细胞表面糖分子连接，在细胞间形成“桥”结果，加入和凝集素互补糖能够抑制细胞凝集。
细胞凝集
细胞凝集是指细胞相互聚集在一起，成为一簇不规则细胞团，现在认为，细胞间联络、细胞生长和分化、肿瘤发生和免疫反应全部和细胞表面分枝状糖分子相关。
细胞凝集反应技术
（1）直接凝集反应技术
颗粒性抗原和对应抗体血清混合后，在电解质参与下，经过一定时间，抗原抗体凝集成肉眼可见凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。细菌或其它凝集原全部带有相同电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀分散状态。抗原和抗体相遇后，因为抗原和抗体分子表面存在相互对应化学基团，所以发生特异性结合，称为抗原抗体复合物，因为抗体和抗原结合，降低了抗原分子间排斥力，抗原表面亲水基团降低，此时已经有凝集趋势，在电解质参与下，中和了抗原抗体复合物大部分电荷，使之失去了经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见凝集反应。
间接凝集反应技术
可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关颗粒表面上，当这些致敏颗粒和对应抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应技术。
载体
含有吸附抗原（抗体）载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多个动物红血球、一些细菌等。
良好载体有以下几点基础要求：
在生理盐水或缓冲液中无自凝现象；
大小均匀；
比重和介质相同，短时间内不沉淀；
无化学或血清学活性；
吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性；
现在使用最广泛是人O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广，因其起源方便，另外绵羊红血球表面有大量糖蛋白受体，极易吸附一些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。

【试验步骤】
大致步骤
土豆凝集素+红细胞悬液 混合
取兔子静脉血配置1％红细胞悬液
PBS+红细胞悬液 混合（对照）


显微镜下观察
摇摆5-10min
观察
具体操作
称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡二十四小时，浸出粗提液中即含有可溶性
土豆凝集素。（老师已做好） 
2、抽取兔子静脉