血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报告.doc

生物化学实验报告
姓 名：

学 号：

专业年级：

组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
实验目的
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；
。
二、实验原理
，。，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
、分子量及含量
血清蛋白质 等电点 分子量 占总蛋白的％
清蛋白 69,000 57～72
α1－球蛋白 200,000 2～5
α2－球蛋白 300,000 4～9
β－球蛋白 90,000～150,000 ～12
γ－球蛋白 ～ 156,000～950,000 12～20
缓冲液pH=，pI＜pH。
血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。
预测血清蛋白电泳区带图
血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带
.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。
三、材料与方法：
：
：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（，）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：。
：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；⑪直流稳压电泳仪（×1）

准备与点样：①取2×8cm的膜条；②；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。
点样示意图：
注意：点样线尽量点得细窄而均匀。
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