实验1微生物细胞大小测定及显微镜直接计数法.ppt

实验八微生物细胞大小测定及
显微铙直接计数法
、实验目的

使用原理,掌握微生物细胞大小的测定
方法。
、明确其计数原
理。掌握使用血球计数板显微镜下直接
进行微生物计数的方法
实验原理
(一)微生物大小测定
微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征
之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测
量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜
测微尺和镜台测微尺
目镜测微尺是一块圆
⊙
形玻片,在玻片中央
把5m长度刻成50等分
或把10mm长度刻成
100等分。测量时,将
其放在接目镜中的隔
板上(此处正好与物镜
放大的中间像重叠)来
测量经显微镜放大后
的细胞物象
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相
同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不
样,因此目镜测微尺测量微生物大小时
须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以
求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小
格所代表的相对长度
镋台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片,
一般将1mm等分为100格,每格长10μm(即
),是专门用来校正目镜测微尺的。校正时,
将镜台测微尺放在载物台上
由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置,都要
经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即镜台
测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此
从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小
所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大
倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测
微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测
微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜
测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小
球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表
示
(二)显微直接计数法
将小量待测样品悬浮液置于计菌器上,于显微镜
下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养
悬浮液,如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大
的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细
茵则采用彼得罗夫霍泽( Petrof hausser)细茵
计数板或 Hawksley计数板。三种计数板的原理和
部件相同,只是细茵计数板较薄,可以使用油镜
观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数
板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型敢玻片,就玻片上
有4条槽而袍成3个平台。中间较宽的平台,被
短横橧分隔成两半。每个半边上面各有一个计数
区
计数区的刻度有两种:
一种是计数区(大方格)分为16个中方格,而每
个中方格又分成25个小方格;
另一种是一个计数区分成25个中方格,而每个中
方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。